3。2 实验仪器

手动合成反应器（定制）、电热恒温水浴振荡器（东联电子技术公司，哈尔滨）、台式离心机（长沙湘仪 TGL-16M）、电子天平（BS12S 赛得利斯）、自动涡旋机（岛津，日本）、恒温烘箱（ 江苏金坛精密仪器，SHY-2A型）

实验室常见仪器，如洗耳球，滴管，圆底烧瓶，试管等。

3。3实验步骤

3。3。1 树脂的溶胀

    称取0。262g树脂，二氯甲烷（CH2Cl2）进行溶胀一次后，甲醇溶液(CH3OH)冲洗收缩一次，再用二氯甲烷进行溶胀两次，静置30min。溶胀后的树脂呈现纯白的晶体颗粒。

3。3。2 树脂Fomc保护基脱除

溶胀后的树脂加入20％的哌啶（配制：80ml哌啶+320mlDMF）8ml，放入摇床中摇荡10min，取出合成反应器后，DMF冲洗试管壁清洗后，再加入8ml的20％哌啶，摇床中摇荡30min。

3。3。3 反应程度的鉴定

      茚三酮溶液：A。40g苯酚溶解于10ml乙醇

                  B。0。5g茚三酮溶解于10ml乙醇

                  C。吡啶溶液

 鉴定方法：取出摇床中的反应管，取样，放置于1。5ml的小试管中，并分别向试管中地区上述A、B、C试剂各2至三滴，混匀后，烘箱温度调至105℃，待温度到达100℃时，将小试管放入烘箱，放置5min后，取出，将小试管置于白纸上，观察颜色，呈现蓝紫色即已脱保护完全。

3。3。4 缩合反应

     称取Fmoc-Ser-OH  0。228g置于小试管中，移液枪移取3ml 10％DMSO/DMF ,1。2ml HBTU(0。12 g, 0。3 mmol),0。6ml DLEA (0。08 g, 0。6 mmol)放入试管中，涡旋机摇匀溶解后，将其倒入手动反应合成管，放入摇床中摇荡2。5h，注意调节摇荡的速度，以确保溶液震荡完全。来*自~优|尔^论:文+网www.youerw.com +QQ752018766*

3。3。5 肽链的延长

     将反应合成管从摇床中取出后，DMF清洗三次后，取样，放于小试管中，取上述茚三酮溶液A、B、C各滴二至三滴，摇匀，放于105℃的烘箱中5min，取出后，将试管放置于白纸上观察是否有蓝色的小颗粒，若溶液呈现黄白色，即已耦合完全，若有蓝色小颗粒，即耦合未完全，需要重新称取氨基酸（按照表1所示的重量）继续进行反应，直至耦合完全。需要注意的是，不同种类的氨基酸耦合的难易程度有所差别，如Ile，Lys，Val，Leu，Arg较难耦合，一般需要进行耦合两次方能耦合完全。