芦丁(rutin)又名芸香苷、紫槲皮苷、维生素P等,分子式为C27H30O16,纯品为浅黄色针状结晶,是一类来源很广的黄酮类化合物,在槐米、芸香全草、银杏中均可找到它。芦丁及其衍生物具有多方面的药理活性,例如抗炎(有研究表明大鼠腹腔注射时能够明显抑制植入羊毛球的发炎过程)、抗菌、抗过敏、抗病毒(有研究表明当浓度为200 g/mL时,能最大程度上抑制水泡性口炎病毒)、抗氧化、镇痛、降低毛细管通透性和抑制醛糖还原酶等等[1-3],临床用于防治高血压[4]、脑出血、视网膜出血、紫癜和急性出血性肾炎,具有广阔的开发前景,所以近几年来,国内外很多学者对其提取工艺的改善、药理作用以及药效学研究等方面做了很多努力,希望能将关于芦丁的研究更深一步,为其临床应用提供利用价值。文献报道[5]的冷碱渗漉法使芦丁回收率提高了5%;郁建平等人[6]的大孔吸附树脂法使芦丁提取率达85%,纯度达95%以上;夏维木等人[7]利用电子自旋共振技术(ESR)发现芦丁对自由基有很强的清除作用,清除率达96%以上,随后他们还做了进一步的研究,通过建立大鼠肾缺血再灌注损伤模型[8],研究芦丁对其肾脏是否具有保护作用以及保护程度如何,应用芦丁后发现,肾脏损伤组脂质过氧化物的形成有所减少,肾脏细胞受损程度有所减轻,从而使得肾脏受到保护,这表明芦丁是一种铁离子螯合剂[9],它能有效降低组织内Fe2+ 水平,从而达到抗脂质过氧化作用,这都是前辈们的研究,当然这只是其中一小部分。前辈们的研究也多集中在如何提高芦丁提取效率、药效学如何、芦丁具有怎样的药理作用,而对于芦丁具体在动物体内的动态变化规律研究甚少,而且芦丁作为药物,药效高,毒性低,且在我国储存量大,未来应用前景广阔,那么对于芦丁在动物体内的药代动力学研究就很有必要了。论文网
国内外虽已有关于黄酮化合物(苷及苷元)的报道,但绝大多数是关于利用紫外分光光度法、高效液相色谱法、胶态电动力毛细管色谱法测定其含量[10]。对于生物样品中芦丁浓度的测定方法却鲜有报道。还有研究表明,生物样品前处理的方法选择及效果如何都会对后期实验中样品及其代谢产物的检测有一定的影响,孙学惠等人[11]就对此进行研究,然后报道了药物检测新技术对药物动力学研究的推动作用,具有一定的参考价值。本实验建立了血浆中芦丁高效液相色谱法的测定方法,通过芦丁灌胃小鼠,不同时间段眼球取血经相关处理后进行高效液相色谱检测,对所得的结果进行分析,从而研究芦丁在动物体内的动态变化规律,了解其药代动力学,为今后芦丁在临床用药等方面提供参考。
1。材料与方法
1。1主要试剂和仪器
试剂:芦丁标准样品、乙腈CH3CN、水(0。1%乙酸)、生理盐水
仪器:高效液相色谱仪HPLC(Waters e2695+2489UV检测器、处理器empower 3)超声波清洗仪、冰箱、铁盘、手术剪、镊子、移液枪(20 mL、200 mL、1000 mL)、电子天平、PU管、离心机、注射器、匀浆管、50 mL离心管、烘箱、一次性针式过滤器
1。2芦丁标准品的获得
芦丁标准品产自西安青藤,放入冰箱冷藏待用
1。3色谱条件
查阅相关文献与资料,得到了HPLC检测芦丁实验中色谱柱为Innoval C18,流动相为乙腈和水(0。1%乙酸),流速为1 ml/min,柱温为30 ℃,进样量为10 L,洗脱梯度:0 min:12%A,88%B:16 min:20%A,80%B;35 min:44%A,56%B;离心温度为4 ℃,波长为265 nm。文献综述
1。4高效液相色谱法(HPLC)检测分析芦丁并制作标准曲线