第二章 实验材料和方法

2。1 实验材料与仪器

2。1。1 实验仪器

表 2-1 实验器材

Tab。 2-1 Experimental equipment

实验仪器名称 规格型号 生产厂家

PCR 仪 2720 Thermal Cycler Applied Biosystems

电泳仪 DYY-8C 型 北京市六一仪器厂 生物电泳图像分析系统 Biosens SC 720B 上海山富科学仪器有限公司

紫外切胶台 SFUV2007 上海山富科学仪器有限公司 台式离心机 5415D 德国 Eppendorf 公司

电热恒温水槽 DK-8D 型 上海精宏实验设备有限公司 隔水式恒温培养箱 GHP-9160 上海一恒科技有限公司

微量移液器 P10，P20，P200，P1000 德国 Eppendorf 公司 冰箱 BCD-239VC 新飞

微波炉 P7021TP-6 格兰仕文献综述

电子天平 PS-Sol 长沙湘平科技发展有限公司 微型漩涡混合仪 XW-80A 上海沪西分析仪器厂

恒温振荡器 WH-861 型 江苏太仓市华美生化仪器厂

2。2。2  主要试剂

表 2-2 实验试剂

Tab。 2-2 Test reagent

名 称 生产厂家

PBO DNA 聚合酶及其 Buffer 金斯瑞

Taq DNA 聚合酶及其 Buffer 金斯瑞 T4 连接酶及 quick Buffer 金斯瑞 dNTP mix 金斯瑞

10×PCR Buffer 金斯瑞

双蒸水 金斯瑞

PCR 引物 金斯瑞

二甲亚砜（DMSO） 金斯瑞

TAE 缓冲液 金斯瑞

琼脂糖凝胶（回收胶，检测胶） 金斯瑞

Marker III 金斯瑞

DL 3000 Marker 金斯瑞

溴酚蓝 金斯瑞

胶回收试剂盒 金斯瑞

质粒小量抽提试剂盒 华因康

2。2 实验方法

2。2。1  确定 PCR 反应的要素

查阅文献发现 PCR 反应主要有以下 5 大要素

（1）引物

在整个的 PCR 体系中，引物占有着十分重要的地位。PCR 的特异性就要求引物以 及靶 DNA 特异性结合，且不以及其他非目的 DNA 结合；PCR 的灵敏性则要求 DNA 聚合酶能能对引物进行有效的延伸，由此可见引物设计的好坏以及 PCR 结果密切相关重 要。