拟南芥ABA响应启动子的克隆及驱动报告基因的植物表达载体的构建(2)
1.1.2 拟南芥生物学特性
拟南芥是芥子族中的一种植物，成熟个体大约有15 cm 高左右。由于个体小可在很空间内种植大量植株。植株可播种在由蛭石、土和珍珠岩的小花盆中生长，也可种在含PNS培养基的培养皿中培育，等长到一定时间后再移入大花盆中对其进行处理，这样就可以把培养皿完全的放在生长箱中，控制t它的环境条件生长，在筛选突变体时可对其排除环境条件的影响，也可以把小花盆直接放到人工气候室中使其进行生长。拟南芥是一种典型自交繁殖的植物，可以人工授粉而完成整个自身的杂交过程。一株拟南芥的种子量很大，如果长的好，它可结上万粒种子，非常便于遗传分析和扩增种子库。拟南芥的生长周期极短，播种后2～3 d 就可以开始萌发，20 d 左右开始抽苔开花，40 d 左右就可以收到其第一个成熟的种子芽，而全株完全成熟则需两个月左右的时间。相比其它作物，这个周期是非常短的，有利于遗传分析。拟南芥另一个长处是很容易人工诱变，产生大量突变体。诱变的方法也是有不同的，有通过物理（辐射）方法将其进行诱变的，化学（如EMS）方法诱变的，以及用T—DNA 插入诱变的和AC/DS 转座诱变的多种诱变。至今各种方法诱变产生大量突变体，为基因克隆、结构和功能的研究创造了很有利的条件。
1.1.3 拟南芥ABA响应启动子的克隆策略
本文对拟南芥ABA响应启动子的克隆所采用的方法为PCR法。PCR是一种非常有效的克隆已知基因的方法。它是模拟DNA体内复制原理的体外基因克隆技术。根据已知的序列，可以在基因两侧设计一对引物（primer），通过DNA的变性（denaturation）、引物与目标序列的退火（annealing）、从引物3端开始延伸(extension)，经过数次这样的循环，可以将一对引物间的序列指数扩增。再经过琼脂糖或聚丙稀铣胺电泳，就可以获得目标基因。变性、退火和延伸可以很容易在热循环仪（也称PCR仪）上实现。PCR可以从基因组的DNA中进行分离和克隆目的序列，也可以用cDNA作为模板进行PCR扩增。从cDNA扩增目的基因的方法叫做逆转录PCR（reverse transcription PCR，RT-PCR）。PCR所使用的DNA聚合酶大多为TaqDNA聚合酶，该酶会在扩增时产生一定的错配率，如果要进行下一步工作，尤其是在下步工作对基因序列要求比较严格时，就要用高保真的DNA聚合酶以保证扩增基因序列的准确性。
1.2 ABA响应启动子
1.2.1 ABA简介
脱落酸（ABA为Abscisic Acid的缩写形式)是植物五大天然生长调节剂之一。单纯的天然活性脱落酸（+)-ABA的生产成本极高，售价高达230.9美元/毫克（Sigma)。由于昂贵的价格和活性上的差异，脱落酸一直未被广泛应用于农业生产，各国科学家都在寻找天然型脱落酸廉价生产的方法。
脱落酸可由氧化作用和结合作用被代谢。脱落酸可以刺激乙烯的产生，催促果实成熟，它抑制脱氧核糖核酸和蛋白质的合成。
ABA是植物体内特别重要的逆境响应激素，被誉为“胁迫激素”，它既是环境胁迫信号的诱导产物，也是胁迫信号的传导者，通过它可使环境信号迅速级联放大。研究表明，ABA与干旱、低氧、低温、损伤、光照、高盐及病原体侵染作用等多种生物和非生物胁迫有关，并引起体内适应性调节反应和基因表达的重要因子。在逆境条件下，植物细胞中的ABA会迅速的积累（或重新区域化）。
ABA是一类发现最早，但研究进展最为缓慢的植物激素，其主要原因是没有找到一个能够定量ABA效应的指标，不像乙烯的“三重效应”那么明显。但近年来人们已经克隆许多受ABA诱导的基因的启动子，它们都含有一个相同的ABA响应元件（G box,ACGT），外源加入的ABA通过信号转导途径能够作用于ABA响应元件，从而诱导基因表达。
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