医用级透明质酸提取过程中杂蛋白的去除(2)
4.5 活性炭处理时间对除蛋白的影响 11
5 结果与讨论 12
5.1蛋白质浓度标准曲线图 12
5.2葡萄糖醛酸浓度标准曲线图 12
5.3 不同种类的活性炭对除蛋白的影响 13
5.4 活性炭的用量对除蛋白的影响 14
5.5 活性炭处理时的温度对除蛋白的影响 16
5.6 PH对除蛋白的影响 17
5.7活性炭处理时间对除蛋白的影响 19
6 结论 20
致 谢 22
参考文献 23
1 绪论
1.1 透明质酸综述
透明质酸存在于动物的各种组织细胞间质中，该物质在1934年首次从牛眼玻璃体中分离出来[1]。透明质酸（Hyaluronic acid，简称HA）又名玻璃酸，由（1-3）-2-乙酰氨基-2-脱氧-D-葡萄糖（1-4）-D-D-葡萄醛酸双糖重复单位所组成的高分子量的直链粘多糖[2]。用各种相对分子质量测定技术如光散射、沉降和扩散以及粘度法等对不同来源的透明质酸进行分子量测定，结果表明，即使是同一组织来源的透明质酸，其分子链的长度及分子量也是不均一的。测定的分子量基本在1.0*105Da～4.0*106Da之间，其中，医用级的一般采用1.0*105Da～2.5*106Da，化妆品需采用5.0*105Da～1.5*106Da。双糖单位数为2000～11000对。透明质酸水溶液所形成凝胶的独特网状结构和分子内羟基氢键使其具有极好的保水性和流变特性，因而被广泛应用于医学、化妆品等领域[3]。近年来，国际市场对药用级透明质酸的需求增长很快[4]。
1.2 透明质酸的分布简述
透明质酸广泛地分布于动物和人体结缔组织细胞的基质中。现在人们已经从结缔组织中（如：脐带、皮肤，人血清、鸡冠、关节滑液、脑软骨、眼玻璃体、人尿、鸡胚、兔卵细胞、动脉和静脉壁等）分离得到透明质酸[5]。在哺乳动物体内，以玻璃体、脐带和关节滑液中的透明质酸含量最高，鸡冠的含量与滑液相似。透明质酸常与蛋白质结合，并与其它粘多糖共存，在玻璃体和滑液中，以溶解形式存在；在鸡冠和脐带中，以凝胶形式存在。动物组织中的透明质酸同样存在于部分细菌中。现在已发现的代谢产生透明质酸的细菌主要有产气杆菌、绿脓杆菌和C溶血性链球菌。
体内多种细胞如上皮细胞、血管内皮细胞纤文母细胞、神经胶质细胞等都能合成并释放，降解主要依赖透明质酸酶。它具有天然黏多糖共性:白色、无嗅、无、有吸湿性、无定型固体、不溶于有机溶剂等。
1.3 透明质酸的理化性质简述
商品性的透明质酸一般以钠盐的形式出现，即透明质酸钠(SH)，常为白色纤文状或白色粉末状固体，具有较强的吸湿性，易溶于水，但不溶于醇、酮等有机溶剂，具有许多天然粘多糖共有的特性，对人体及动物无抗原活性。透明质酸分子链的长度及分子量是不均一的，电子显微镜下观察证实透明质酸为一线性单链，链长约为10um。由于直链链轴上单糖之间氢键的作用，透明质酸分子在空间呈刚性的螺旋柱型，其半径为200nm。柱内侧因有大量羟基而产生强亲水性。在溶液中透明质酸结合的水分可达其本身重量的1000倍，且这些水在螺旋柱内固定不动。透明质酸分子间这种特定的构型，使其具有很高的粘度和润湿作用。在生物组织中，透明质酸以游离形式广泛分布于结缔组织的细胞外基质(ECM)中，是ECM的主要成分之一，在文持组织形态和保持组织抗压缩性及张力方面具有重要作用。透明质酸的浓度对壳聚糖一凝胶一透明质酸(Cs-Gel-HA)膜层的生物兼容性有很大影响。浓度0.01％～0.1％的透明质酸溶液，能增强细胞粘性，促进迁移和增生；若浓度大于0.1％，则会降低或抑制这些作用。Gibbs等还发现，低浓度的透明质酸溶液呈粘性，而高浓度的透明质酸溶液主要显弹性。