不同浓度褪黑素对盐胁迫下番茄种子发芽及幼苗生理指标的影响(3)
122幼苗生长试验
将经过消毒的番茄种子浸种催芽，种子胚芽突出种皮后，播于72孔穴盘，育苗的基质为商业化的有机栽培基质（镇江兴农有机肥有限公司，中国），生长期间浇灌日本园试营养液，待幼苗长出2片真叶时，将大小相对一致的健壮幼苗移入32孔穴盘，以石英砂（10目）为基质，将穴盘放入长、宽、深分别为54cm、28cm、6cm的浅塑料托盘中，加入5L 1/2日本园试营养液，每2天更换1次。
待幼苗长到4~5叶1心时，共设12个处理。6个处理用含200 mM NaCl的日本园试营养液培养，分别喷施0、10、50、100、200、500µM的褪黑素溶液；另外6个处理用未加NaCl的日本园试营养液培养，同上喷施对应浓度的褪黑素溶液。每日19:00叶面喷施一次，每2d更换一次营养液。每16株幼苗为一个重复，试验重复3次。
13 测定项目与方法
131 发芽率、发芽势及发芽指数测定
每隔4小时统计一次培养皿中发芽种子粒数，拍照记录种子发芽情况。5天后，待种子不再继续发芽，统计发芽种子数，计算以下指标：
发芽率=发芽种子总数/供试种子总数*100%
发芽势=发芽高峰时（第二天）发芽种子数/供试种子总数*100%
发芽指数=∑（当天发芽种子数/对应发芽天数）
132 幼苗生长指标测定
在幼苗盐处理第10d，测定幼苗的生长指标。每个处理分别取6株幼苗，将石英砂洗净擦干后，测定其株高和茎粗。将幼苗分为地上和地下两个部分，称量鲜重，然后放入120℃杀青30min，80℃烘至恒重，称量其干重。
133 叶绿素含量测定
叶绿素含量参照王学奎等[5]的方法测定。在处理第6d，取顶部向下第3片成龄叶，利用紫外-可见分光光度计（Techcomp UV-1100,Beijing,中国）测定吸光值并计算叶绿素a、叶绿素b、叶绿素a/叶绿素b和总叶绿素含量。
134 H2O2含量的测定
在处理第6d，取顶部向下第3片成龄叶，称重，并快速置于液氮中，之后保存在-80℃超低温冰箱中，备用。H2O2含量参考Chakrabarty等（2008）的方法[6]，利用紫外-可见分光光度计（Techcomp UV-1100,Beijing,中国）测定吸光值，并根据公式计算物质含量。
135 电解质渗透率的测定
电解质渗漏率参照Bajji等（2004）的方法测定[7]。在盐处理第6d，取幼苗第3片成熟叶，利用电导率仪（上海雷磁仪器厂DDSJ-308A，上海，中国）进行电导率的测定。电解质渗漏率=煮前电导率（A）/煮后电导率（B）。
136 丙二醛（MDA）含量的测定
丙二醛含量的测定参考Kumar等（1993）的方法[8]。在在盐处理第6d，取顶部向下第3片成龄叶，利用紫外-可见分光光度计（Techcomp UV-1100,Beijing,中国）测定吸光值并计算丙二醛含量。
14 数据处理
采用Excel 2016和SPSS160进行数据分析和绘图，Duncan,s多重比较法进行数据统计分析。
2 结果与分析
21不同浓度褪黑素对盐胁迫下番茄种子发芽指标的影响
由图2可知，经40h 75 mM NaCl胁迫后，处理间发芽率开始出现显著差异。
经120h 75 mM NaCl胁迫后，相比对照949%的发芽率，未经褪黑素处理的种子发芽率只有627%，由此可知盐胁迫显著降低番茄种子发芽率。在0、01、1、10、50、100、500μM褪黑素浓度下，6个不同浓度褪黑素处理的番茄种子间发芽率差异显著，其中50 μM褪黑素缓解盐胁迫的效果最佳，发芽率为887%，其次为10μM褪黑素，发芽率为727%。而100、500μM高浓度褪黑素则加重盐胁迫带来的伤害作用，发芽率分别为613%和607%，进一步抑制种子发芽。
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