5。7 农杆菌感受态的制备与转化 8

5。8农杆菌介导的水稻转化 8

6。 水稻培养 8

6。1 选种 8

6。2 育种 8

6。3种子移植 9

6。4 水稻营养液的制备 9

6。5 营养液的制备与更换 9

7。 水稻光反应分析 10

7。1 遮光对比 11

8。 实验结果及分析 12

参考文献 13

致谢 14

引言

1。 选题背景与意义及趋势论文网

水稻是我国主要的粮食作物，因而培育高产水稻品种是关系我国社会稳定的重要课题。水稻在我国的种植区域较广，北至黑龙江南至海南岛都有种植，其中北方以粳稻为主，南方以籼稻为主。因南方处于不同纬度，因而必须培育适合当地光强的水稻品种。众说周知叶绿体是植物进行光合作用的主要场所，是植物对光反应的重要器官，当叶绿体受到破坏会严重影响植物的生长与繁殖。

因而培育高产品种的重要基础是找到适合当地光强的亲本资源。前期研究我们发现DRT1是一个叶绿体膜定位的蛋白，因此我们推测该蛋白可能参与光反应。为了验证我们的假设，我们把野生型DRT1基因转入drt1突变体中，然后去比较这三个材料的光反应。我们发现，在强光照射下，野生型水稻叶片发生褪色，而drt1突变体突变体叶片并没有发生较为明显的褪色。有趣的是，转基因材料也和野生型水稻一样表现出褪色表型这个试验研究首先证明了强光会破坏野生型水稻叶片的叶绿体结构或改变叶绿体的迁移过程；其次证明DRT1基因可以保护叶绿体完整性或影响叶绿体的光逃逸进程。 这个实验证明DRT1可能参与水稻光反应。

2。 实验材料

水稻野生型植株；大肠杆菌感受态细胞；DNA提取液；离心管；本实验需要目的基因片段；质粒；移液枪；实验所需的种子若干块遮光板以及一些所需的实验试剂等。

3。 实验步骤

3。1  DNA提取

磨样：取水稻叶片2-3cm（约50-100mg）放入2。0ml的离心管中，加入一颗钢珠，盖好盖子，将离心管放入液氮中冷却，再用研磨机进行研磨，将叶片研磨成粉状[5]。

加入400μL DNA提取液，75℃水浴锅恒温水浴30min，每十分钟混匀一次（可适当延迟水浴时间）。

当水浴结束以后将离心管放入离心机中并确认管子的密封性后，开始离心12000rpm，离心10分钟。

向新的1。5ml离心管中添加离心后的上清液，加入等量体积的异丙醇，在添加完后上下颠倒混匀数次，再放入4℃冰箱静置5分钟。

12000rpm，离心10分钟，弃上清。文献综述

加入75%的乙醇溶液洗涤DNA沉淀，并于8000rpm，离心5min，弃上清。

将离心管放入超净台风干后，加入200μL TE溶液或ddH2O，溶解DNA，于-20℃保存备用。

3。2   基因鉴定

20μLPCR反应体系如下：

          组分Component             体积Volume (μL)