拟南芥SEC6基因在主根细胞程序性死亡中的功能初步研究(2)
1.3.7 拟南芥总 RNA 的提取7
1.3.8 RNA 反转录7
1.3.9 Real - t ime PCR8
2 结果与分析8
2.1 拟南芥 SEC6 基因突变导致主根生长缺陷8
2.2 SEC6 基因突变导致主根细胞死亡9
2.3 sec6 突变体主根细胞死亡属于细胞程序性死亡10
2.4 阻断 RboHD 途径不能缓解 PRsec6-1 突变体主根细胞 PCD10
2.5 乙烯信号途径对 PRsec6-1 突变体主根细胞 PCD 的影响11
2.6 Real-time PCR 方法检测基因表达差异11
3 讨论 12
3.1 Exocyst 复合体亚基 SEC6 基因突变导致主根程序性死亡12
3.2 SEC6 基因突变导致主根 PCD 是由乙烯信号途径介导的13
4 讨论 13
4.1 乙烯在拟南芥 PRsec6-1 突变体主根细胞 PCD 中的作用13
4.2 活性氧在拟南芥 PRsec6-1 突变体主根细胞 PCD 中的作用13
4.3 其他信号途径在拟南芥 PRsec6-1突变体主根细胞 PCD中的作用13
致谢14
参考文献15
附录 16
在细胞中，各细胞器之间的物质运输主要是由囊泡来介导的，囊泡运输机制对于文
持和调控细胞内交通起着至关重要的作用[1-2]。囊泡运输的过程包括出芽，转运，拴系和融合 4 个步骤[1]。拴系过程是囊泡与靶膜结合的第一步，在这个过程中，栓系因子发挥作用。Exocyst 复合体是广泛存在于真核生物中的拴系复合体，在进化上高度保守。
Exocyst 复合体由8个亚基组成，分别为 SEC3，SEC5，SEC6，SEC8，SEC10，SEC15，
EXO70 和 EXO84[3-5]
。在酵母和人类细胞中，Exocyst 的各亚基都是单拷贝的，但在拟
南芥中 SEC6，SEC8，SEC10 基因只有一个拷贝，SEC3，SEC5，SEC15 基因有两个拷
贝，EXO84 基因有 3 个拷贝，而 EXO70 基因则多达 23 个拷贝[6]。Exocyst 复合体在植
物细胞分裂中细胞板的形成，细胞极性的形成，细胞壁的形成以及抵御生物胁迫，细胞自噬中发挥作用。例如，在烟草细胞中，拟南芥 SEC6 修饰扩展中的细胞板并与SEC1/KEULE 存在共定位[7]
。Exocyst 复合体定位于细胞板嵌入细胞壁以及细胞壁形成过程，确认了 Exocyst 在新生细胞板与母细胞结合以及新细胞壁的成熟中的作用[8-9]。
sec6，exo84 突变体的叶表皮扁平细胞中存在弱胞质分裂缺陷，在保卫细胞中存在较强的胞质分裂缺陷，这些缺陷会导致胞质分裂后新形成的细胞中未成熟的细胞板出现垮塌现象[8]
。深入研究 exocyst 复合体，了解其生物学功能及其作用的分子机制是十分重要的。 细胞死亡的基本类型主要有两种，分别是细胞程序性死亡（PCD）和细胞坏死[13]。
PCD是生物体生长发育过程中，由自身基因编码的、主动并有序的进程，是生物体新陈
代谢过程中正常的生理反应[10]
。细胞的程序性死亡的发生通常伴随着一些特定的形态、
生化特征出现。在凋亡的起始过程，主要表现为细胞表面的特化结构入微绒毛的消失，
细胞间接触的消失。随后凋亡小体形成，核染色质断裂为大小不等的片段，与某些细胞
器聚集，为反折的细胞膜所包围，使细胞表面产生许多泡状或芽状突起，以后逐渐分割，
形成单个的凋亡小体。凋亡小体逐渐为邻近的细胞所吞噬并消化[11]。在生化上，PCD的细胞表现为核酸内切酶活性增加，核 DNA 从核小体间降解断裂，产生带有 3'-OH 末端的、大小不同的寡聚核小体片段[12-13]，使用TUNEL试剂可检测到这些片段[14]。植物细胞 PCD 的发生可能与一些调控因子，如活性氧、乙烯、水杨酸等相关。如，将烟草的原生质体处于高浓度的盐水环境中，用流式细胞仪同时检测活性氧的含量和细胞凋亡的水平时发现，在发生细胞凋亡之前，细胞中的活性氧含量增加[15]。另外，研究表明低
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