4 讨论 11

结论 13

参考文献 14

致谢 15

1 前言

1。1 Sox9 基因研究背景

Sox 基因家族是在 HMG 保守盒内与哺乳动物性别决定基因 SRY 的相似性大于 60 %的 一系列基因[1]。Sox9 基因是紧靠 SRY 基因的下游基因，它的研究对于性别决定机制的研究 有着十分重要的意义[2]。Sox9 基因参与多种生理活动的调控，其中最主要的功能还是性别 决定[3]。该基因也是鱼类起源和进化研究中的常用基因。目前多种鱼类中已有 Sox9 基因的 研究报道[4]，如罗非鱼（Oreochromis aurea）、黄鳝（Monopterus albus）、西伯利亚鲟（Acipenser baeri Brandt）[5-7]等，但关于华鳈 Sox9 基因的研究开展不多。另外，该基因也是鱼类起源 和进化研究中的常用基因。

1。2 华鳈概述

华鳈（Sarcocheilichthys sinensis）属鲤形目，鲤科，鰁属。在我国平原地区的江河、 湖泊均有分布[8]。鳈属鱼类在我国记载的有 8 种，而只有 1951 年前苏联学者对黑龙江流域 的东北鳈（S。 lacustris Dybowski）的早期发育做过简单概述[9]。华鳈个体较小，数量少， 生长缓慢，其肉可食，也可入药，具有安胃和中、利小便、来自优I尔Y论S文C网WWw.YoueRw.com 加QQ7520~18766 解热毒之功效，主治水肿胀满、 黄疸、疮毒等症[10]。同时因其体色鲜艳，个体小，易于饲养等特点，作为观赏鱼已越来越 受人们的喜爱[11]，有一定的经济价值[12]。目前对于华鳈的研究只要集中在人工驯养和繁殖 阶段。

1。3 研究目的与意义

人与动物的性别决定机制的研究一直是生命科学中研究的重要领域，而鱼类作为最低 等的脊椎动物类群，也作为水生到陆生进化环节中的重要环节，其性别决定具有原始性， 可塑性和多样性等特点。由于 Sox9 基因对于研究性别机制有着十分重要的意义，因此研 究华鳈的 Sox9 基因对于华鳈的养殖有着一定的意义，不仅可以完善华鳈研究的领域，也 具有一定的经济价值。本研究拟采用 RT-PCR 和 RACE 法克隆获取华鳈 Sox9 基因序列并 进行进化分析，以期为后续研究中在该基因中的搜寻多态性位点并进行关联分析，以及性 别决定机制与生长等研究提供参考。

2 材料与方法

2。1。1 实验所用仪器

Mini-7k  微型离心机 杭州奥盛仪器有限公司

Gel DocTM EZ Imager 凝胶成像系统

VORTEX-5  震荡器 海门市其林贝尔仪器制造有限公司

DYY-6C 型 电泳仪电源 北京市六一仪器厂 UVG20 紫外分析仪 上海领成生物科技有限公司 Eppendorf 单道微量可调移液枪

ND-2000C 微量紫外分光光度计 Gene Company Limi 基因有限公司论文网

DK-S24 电热恒温水浴锅 上海精宏实验设备有限公司 太仓精宏仪器设备有限公司

HPS-160 生化培养箱

SN210C 灭菌锅

DH6-914385-Ⅲ 电热恒温鼓风干燥箱 上海新苗医疗器械制造有限公司

BSA124S 电子天平 塞多利科学仪器（北京）有限公司 IMS-100 全自动雪花制冰机 常熟市雪科电器有限公司 TGL-16GB 高速台式离心机 上海安亭科学科学仪器 2。1。2 实验所用药剂

LB AMP+ 有氨苄青霉素 LB 液体培养基

LB AMP- 有氨苄青霉素 LB 液体培养基

Gel Extraction Kit 快速琼脂糖凝胶 DNA 回收试剂盒 康为世纪生物科技有限公司