甘蓝型油菜杂种与亲本在盐胁迫下生理性优势的比较(3)
1．2．2 激光共聚焦显微镜测定植物根细胞中一氧化氮（Nitric oxide, NO）含量
取不同处理的油菜植株根部置于载玻片上，将DAF-FM DA （4-amino-5methylamino-2’, 7’-difluorofluorescein diacetate, NO荧光探针）稀释1000倍后，将植物根部浸泡于稀释液中15 min使根部细胞与探针充分接触，之后用吸水纸将稀释液吸干后，用PBS（pH=7.4）洗涤三次后，滴加PBS，压片，制作根部临时装片。用激光共聚焦荧光显微镜直接观察荧光强度（使用495 nm激发荧光，观察515 nm荧光强度）。比较三品系的荧光强度。
1．2．3 TBA法测定植物组织中丙二醛（Malondialdehyde, MDA）含量[8]
称取不同处理的待测植物叶片组织样品0.2 g，加入2 mL 10%三氯乙酸（Trichloroacetic acid, TCA）溶液，将植物组织研磨至匀浆，匀浆4000 rmp离心10 min后取上清。向上清内加入2 mL 0.67% 硫代巴比妥酸（Thiobarbituric acid, TBA）溶液，混匀后沸水浴加热15 min,迅速冷却后4000 rmp 离心。取上清液测定其在450 nm、532 nm、600 nm下的吸光度值（以TBA 调零）。按公式A532=-0.00198+0.088A450求出样品中糖分在532 nm处的吸光度值(A532), 用实测532 nm 的消光度值减去600 nm 非特异吸收的消光度值再减去A532，其差值为测定样品中丙二醛-硫代巴比妥酸（MDA-TBA）的消光度值。按丙二醛（Malondialdehyde, MDA）在532 nm 处的毫摩尔消光系数为155换算求出提取液中MDA 浓度。
1．2．4 酸性茚三酮测定脯氨酸（Proline, Pro）含量[9]
准确称取不同处理的待测植物叶片组织样品各0.2 g，用2 mL 3% 磺基水杨酸研磨提取，分别转移至试管中，在沸水浴中提取10 min，（提取过程中要经常摇动），冷却后，4000 rmp 离心10 min，将上清置于另一干净的带玻塞试管中，加入 2 mL 冰醋酸及2 mL 酸性茚三酮试剂，封口以防过分蒸发，在沸水浴中加热30 min，溶液即呈红色。冷却后加入4 mL 甲苯，摇荡30 s，静置2 h。吸取上层脯氨酸（Proline, Pro）红色甲苯溶液于比色皿中，以甲苯为空白对照，在分光光度计上测量520 nm 波长处吸光度，求得吸光度值，A520大小为0.2-0.8之间为佳，若值太高，应适当用甲苯稀释。配置标准溶液制作标准曲线，按照y = 0.0869x + 0.0052换算脯氨酸含量。
1．2．5 叶绿素（Chlorophyll）含量测定[8,10]
称取不同处理待测植物叶片组织样品0.05 g，置于7 mL 试管中，加入5 mL 95% 作为叶绿素（Chlorophyll）提取液，黑暗静置过夜至叶片组织完全变白。测定提取液在665 nm，649 nm 和470 nm 下的吸光度值（以95% 乙醇调零）。根据公式Ca=13.95A665-6.88A649, Cb=24.96A649-7.32A665, Cλc=（1000A470-2.05Ca-114.8Cb）/245计算出叶绿素含量。
1．2．6 植物组织干鲜重比（Relative water content, RWC）及K+/Na+测定[11]
取植株地上部分，装于样品袋中，称量样品鲜重（FW）并标注于样品的表面。将样品置于烘箱中完全烘干后，称量样品干重（DW），计算样品的干鲜重比确定植株地上部分相对含水量（Relative water content, RWC）。
将烘干的植物组织样品研磨至粉末，并称取样品粉末0.05 g，置于用10% 稀硝酸酸泡过的微波消解石英管中，加1 mL 硝酸（分析纯）作为植物组织溶解剂，将石英管置于消解罐中，往罐中加入8 mL 去离子水，组装消解罐，将消解罐放入微波消解仪中微波消解1 h。微波消解后，将罐体冷却至室温。罐体冷却后打开微波消解罐，将石英管中的液体吸出，用去离子水定容至10 mL （使用10 mL 容量瓶之前，需将容量瓶在10% 稀硝酸中浸泡2 h 以上，以保证完全除去容量瓶中原有的钠和钾离子）。按照标准液配方表配制Na+和K+混合标准液，利用原子发射光谱仪（ICP）测量消解液中的Na+和K+含量，并计算K+/Na+。
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