甘蓝型油菜杂种与亲本在盐胁迫下生理性优势的比较(4)
1．2．7 Greiss试剂法测定植物叶片组织中的一氧化氮含量[12]
取植物叶片组织待测样品0.2 g，加入1 mL 去离子水研磨匀浆，转移至7 mL 离心管中，加入1 mL 50% 醋酸钠溶液（50 g NaAc 加去离子水定容至100 mL）和1 mL 0.1% 磺胺（对氨基苯磺酸）溶液（0.1 g 磺胺溶于100 mL 去离子水中，由于磺胺难溶于水，因此溶解时需煮沸加热溶解）后摇匀。用1 M 的HCl 调节pH 至6.25-6.35，并加入0.03-0.05 g 锌粉后，振荡10 min。将处理液分装至3个2 mL 小管中，往每个小管中加入500 μL 正丁醇（用于脱色），振荡5 min。将处理液置于高速离心机中，1200 rmp 下离心15 min 后，取中间层1/2-2/3 体积，将三个小管中提取到的中间层合在一个管中，再次12000 rpm 下离心15 min，取中间层1.5 mL 及以上。取0.5 mL 提取液，加入1 mL 萘胺显色，用磷酸调节pH 至1.75-1.85，37℃ 下静置反应20 min 后，测量540 nm 处的吸光度，记为A样。并取0.5 mL 提取液，加入1 mL H2O 用磷酸调节pH 至1.75-1.85，37℃ 下，静置反应20 min 后，测量540 nm 处的吸光度，作为样品对照空白标准吸光度，记为A样对空，NO含量=[(A样-A试空-A样对照)/(A标-A试空)]×60 （单位：μmol/L；A标：标准液按照1 mL 2mM KNO3+1 mL 50% NaAc +1 mL 0.1% 磺胺配制之后与样品提取液一起进行“调节pH 至6.25-6.35”以及后续所有处理后，测量540 nm 处吸光度；A试空：按照1 mL H2O+1 mL 50% NaAc +1 mL 0.1% 磺胺配制之后与样品提取液一起进行“调节pH 至6.25-6.35”以及后续所有处理后，测量540 nm 处吸光度）。
1．2．8 数据分析处理
所有的实验数据均使用来自至少三次平行实验所得的平均值±标注误差来表示，数据的统计分析使用SPSS软件16.0版进行，数据的差异性分析采用Duncan多重测验的方法进行，差异显著性设置在P<0.05的水平。
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