2材料与方法

2。1实验材料

供试青菜品种为澳洲美玲夏美青梗菜，由福建省建阳市晓富种子有限公司生产。

供试菌株：环洪泽湖重点实验室从水稻土壤中分离的枯草芽孢杆菌YC-9。

基质：购自淮安柴米河农业科技发展有限公司。

2。2试剂和仪器

蔗糖、琼脂、蛋白胨、乙醇、尿素、磷酸二氢钾、无菌水

灭菌锅、恒温培养箱、摇床、离心机、烘箱等。

2。3菌液的制备

2。3。1平板培养

选用PDA培养基（20g蔗糖，15g琼脂，5g蛋白胨，200g土豆），将枯草芽孢杆菌YC-9接种到平板上，在28℃恒温箱中培养24h,长出单菌落后重复上述步骤，共活化三次，结果如图1。

图1：YC-9平板划线

2。3。2菌悬液的制备源C于H优J尔W论R文M网WwW.youeRw.com 原文+QQ752-018766

用已灭菌的接种环从平板上挑取单菌落接种到装有5ml PD培养基的锥形瓶中，180rpm，35℃条件下摇床培养24h后，再用移液枪吸取5ml培养后的发酵液转入装有50ml PD培养基的锥形瓶以同样条件培养，然后再用移液枪吸取10ml培养后的发酵液转入装有300ml PD培养基的锥形瓶中同条件培养最终得到2升发酵原液，结果如图2。

图2：YC-9发酵原液

2。3。3供试菌液及对照组的准备

取500ml发酵原液，4000r/min离心6min。将菌株和清液分离，用5ml无菌水将菌体制成悬浮液作为菌株原液。最后把YC-9的发酵原液、上清液和菌株原液分别稀释10倍、100倍、500倍备用。用尿素和磷酸二氢钾配制对照CK1（尿素0。2%，磷酸二氢钾0。1%），用无菌水作为对照CK2。

2。4 枯草芽孢杆菌YC-9发酵液对青菜生长的影响

2。4。1枯草芽孢杆菌YC-9发酵液对青菜物理指标的影响

实验地点为生科楼511实验室，将种子分为十一组，每组十颗，栽种到装基质的穴盘中，分别用YC-9的发酵原液、上清液和菌株原液稀释10倍、100倍、500倍后的10ml溶液和CK1、CK2浇灌各组种子,七天后再按上述操作进行一次浇灌，生长20天后，每组处理取五株青菜苗，测量各项指标（期间用蒸馏水为植株补充必需的水分）。

2。4。2枯草芽孢杆菌YC-9发酵液对青菜叶绿素含量的影响

取青菜（各处理后20 d）新鲜叶片剪碎后称0。1 g置于研钵中，加入3ml 95%的乙醇研磨至组织变白，静置3-5min。把滤纸放入漏斗，用乙醇湿润，将研磨得到的提取液过滤到10ml的容量瓶中，用乙醇冲洗残渣数次，再用胶头滴管吸取乙醇将滤纸上的叶绿素洗入容量瓶，用95%的乙醇定容至10 mL。以95%乙醇为空白对照，测定649nm、665nm下的吸光度，再根据公式计算叶绿素总含量,每组处理取三株青菜作为三个重复。

3。结果与分析

3。1幼苗期青菜各项指标测定结果论文网

3。1。1株高、根长、茎粗、叶面积、鲜重、干重的统计

处理后的青菜幼苗如图3所示，幼苗的株高、根长、茎粗、叶面积、鲜重、干重如表1所示。

表1：青菜幼苗各物理指标

处理 株高 根长 茎粗 叶面积(长*宽) 鲜重 干重

m m m m m m m m2 g/株 g/株

9清500 107。4 48。2 1。90