1.3抗氧化活性研究

自由基是化合物或单质均裂产生的具有未成对电子的原子或基团。其单电子具有与其他原子或基团结合产生稳定结构的倾向，因此，较为活泼的自由基也是多数反应的活性中间体。人体内含有两大类自由基，分别为非氧自由基和氧自由基，其中氧自由基占体内总自由基量的95%，在体内具有一定的主导地位[42]。自由基过量对机体危害较大，但同时机体存在两种防御自由基危害的措施：其一是通过非酶类物质，主要是抗氧化剂（包括多种维生素、谷胱甘肽[43]等）或自由基清除剂（包括植物及其提取物、黄酮类物质等[44]）。

植物多酚的抗氧化活性评定方法主要有化学分析法、细胞抗氧化实验以及动物实验法[45]。化学分析法测定抗氧化活性机理主要表现在以下个方面：清除自由基(DPPH自由基、羟基自由基、ABTS自由基和超氧阴离子自由基)能力以及还原能力。

1.3.1植物多酚的还原能力

还原力是表示抗氧化物质提供电子的能力重要指标，抗氧化剂通过本身的还原能力给出电子，而使自由基变成稳定的分子，从而失去活性[46]。还原力越强，抗氧化性越强[47,48]。

1.3.2植物多酚对超氧阴离子自由基的清除能力

罗光华等[49]经过研究植物中多酚物质超氧物自由基的清除作用，发现酚类物质与SOD活性物质有类似的电泳行为，叶片中的酚类物质可能为非酶促清除超氧物自由基的组份。人工合成的酚类化合物(间苯二酚、对硝基酚、愈创木酚)和从植物中分离的鞣酸等，在体外均能有效地清除超氧物自由基[50]。

1.3.3植物多酚对羟自由基的清除能力

羟自由基是目前已知的最活泼的活性氧自由基，也是毒性最大的氧自由基，它几乎可以与活细胞中任何分子发生反应，可介导机体组织脂质过氧化，蛋白质解聚、聚合，核酸断裂和多糖断裂等生化过程，引发组织病变，导致各种疾病的发生和加速机体的衰老[47,51,52]。

1.3.4植物多酚的清除DPPH自由基的能力

DPPH自由基因为苯环的共轭和位阻以及硝基的吸电子作用，是一种稳定的自由基，其溶液在517nm处有较强的吸收，自由基清除剂能使DPPH自由基的单电子配对，溶液的吸光值变小，因此吸光值的变化可以定量的反映出其自由基的清除能力。

1.3.5植物多酚的清除ABTS自由基的能力

ABTS原液与过硫酸钾在黑暗中反应12-16h后，被氧化后生成稳定的蓝绿色ABTS阳离子自由基，此时加入抗氧化物质与ABTS反应，使ABTS阳离子自由基体系褪色，并在最大吸光波长734nm处有吸光度变化[53-55]。

1.4研究主要内容及意义

目前有关加拿大一枝黄花的研究报道不断增多，但大多集中在如何防治、生物特性以及提取工艺等方面，对其有效成分的纯化等方面研究处于起始阶段，主要存在以下问题：首先现有提取分离加拿大一枝黄花的工艺大多停留在溶液萃取，离子沉淀等传统方法，技术陈旧，过程繁琐，生产周期过长，对有效成分结构的破坏，产品得率不高，有机试剂消耗过大等缺点；其次，加拿大一枝黄花中含有较多有效成分，需要通过适当的高效的分离纯化方法进行获取，使得其有效成分可以被充分利用，提高原料的利用率。因此设计一条流程短，成本低，绿色的工艺路线势在必行。

本实验首先获取花序中的有效成分并进行含量测定；利用大孔树脂考察不同因素对加拿大一枝黄花花序组织总多酚吸附纯化效果的影响，同时检测纯化后花序组织中多酚的抗氧化活性，为加拿大一枝黄花资源可以合理利用提供有力依据。