采用木糖生物转化天然香料2-苯乙醇的工艺研究(5)
2.实验物品与方法
2.1主要原料与试剂
原料及试剂 型号 厂家
木糖
L-苯丙氨酸 食品级 无锡晶海氨基酸有限公司
MgSO4 A.R. 上海统亚化工科技发展有限公司
K2HPO4 A.R. 上海精化科技研究所
KH2PO4 A.R. 上海精化科技研究所
NaCl A.R. 上海精化科技研究所
DNS试剂 C.P 实验室配制
2.2主要仪器
仪器 型号 厂家
电子天平 JA2103N 上海民桥精密科学仪器厂
恒温摇瓶柜 DHZ-D 江苏太仓市实验设备厂
电热恒温干燥箱 DHG-9245A 上海一恒科技有限公司
电子灭菌锅 BIOFIO 100 NEW BRONSWICK SCIENTIFIC
台式离心机 TGL-5 上海安亭科学仪器厂
超净工作台 SA-900-1JE 上海稼丰园艺用品有限公司
紫外分光光度计 752型 上海光谱仪器有限公司
气相色谱仪 6890A 美国安捷伦科技有限公司
高效液相色谱仪 1260 美国安捷伦科技有限公司
2.3菌种
即发活性干酵母：本实验室保藏
2.4生物转化培养基
木糖 10g/L， MgSO4 5g/L，KH2PO4 5g/L，NaCl 1g/L，L-苯丙氨酸 10g/L，自然PH，装液量50mL/250mL ，8层纱布扎口，高压蒸汽121℃灭菌15min（苯丙氨酸单独通过过滤灭菌）。
2.5实验方法
2.5.1菌种筛选
用转化培养基对5种酿酒酵母菌株转化合成2-苯乙醇的能力进行比较，以筛选转化合成2-苯乙醇浓度较高的菌株。将活性干酵母加入灭菌后的转化培养基后，于28℃、220r/min的恒温振荡摇床中转化48小时。转化培养结束，测定2-苯乙醇的浓度。每种酵母转化培养设置3个重复。
2.5.2单因素实验
实验研究木糖浓度、L-苯丙氨酸浓度、MgSO4浓度、KH2PO4 浓度、NaCl浓度、温度、PH、装液量等8个因素对生物转化天然香料2-苯乙醇产率的影响，确定显著因素和因素变化范围。各因素水平设置如下：木糖2，6，10，20，30g/L；L-苯丙氨酸2，6，10，20，30g/L；MgSO4 2，3，4，5，6，7g/L；KH2PO4 2，5，8，11，15g/L；NaCL 0.1，0.5，1，2，3g/L；温度20，25，28，32，35℃；PH=5，6，6.5，7，8；装液量50mL/250mL，75mL/250mL，100mL/250mL，125mL/250mL，150mL/250mL。
取灭菌后的转化培养基，在无菌室中每瓶各加入对应浓度的活性干酵母和L-苯丙氨酸，最后放入28℃，220r/min恒温摇瓶柜中发酵培养48小时。样品在3000r/min下离心5min，取上清液，通过DNS法测定发酵液中木糖含量，用液相色谱法分析样品中的2-苯乙醇浓度和L-苯丙氨酸浓度，用气相色谱法分析样品中的2-苯乙醇浓度和乙醇浓度。
2.5.3响应面实验
在单因素的基础上，确定了对响应值具有重要影响的因子后，采用Box-Behnken 试验设计方法，对生物转化天然香料2-苯乙醇影响因素进行更为深入的研究和条件优化，考察2-苯乙醇转化浓度与培养基主要成分之间和培养条件的关系，旨在建立它们之间的回归方程模型，做出响应面图，并对模型进行分析，确定最佳培养基组成及培养条件。
2.6分析方法
2.6.1 液相色谱法分析发酵液中的2-苯乙醇浓度和L-苯丙氨酸浓度
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