采用木糖生物转化天然香料2-苯乙醇的工艺研究(6)
（1） 检测条件[27]
色谱柱：C18；
流动相：甲醇：蒸馏水=60:40
流速：0.8 mL/min
进样量：0.5μL
（2） 混样配制
取0.2g 2-苯乙醇标准品和0.5gL-苯丙氨酸于烧杯中，加蒸馏水混合转移至100mL容量瓶中，定容。
2.6.2 气相色谱法分析发酵液中的乙醇与2-苯乙醇
（1）检测条件
色谱柱：HP-5；
进样口T：250℃；
检测器T：250℃；
进样量：0.2μL；
分流比：30:1；
恒流：0.8mL/min；
程序升温：40℃后以20℃/min速率升温到250℃，保持2min。
（2）混样配制
取0.2g2-苯乙醇标准品和0.1g无水乙醇于烧杯中，加蒸馏水混合转移至100mL容量瓶中，定容。
2.6.3木糖含量的测定
DNS法测还原糖[25][26]，DNS即二硝基水杨酸法是利用碱性条件下，二硝基水杨酸（DNS）与还原糖发生氧化还原反应，生成3-氨基-5-硝基水杨酸，该产物在煮沸条件下显棕红色，且在一定浓度范围内颜色深浅与还原糖含量成比例关系的原理，用比色法测定还原糖含量。因其显色的深浅只与糖类游离出还原基团的数量有关，而对还原糖的种类没有选择性，故DNS方法适合用在多糖（如纤文素、半纤文素和淀粉等）水解产生的多种还原糖体系中。
3.结果与分析
3.1 2-苯乙醇与L-苯丙氨酸的含量测定
2-苯乙醇与L-苯丙氨酸混合标准样品的液相图谱，如图3-1。根据外标法的定性定量的性质，2-苯乙醇保留时间为1.382min，L-苯丙氨酸保留时间为2.525min；计算样品浓度采用计算公式：
（1）
由公式（1）及图3-1确定了2-苯乙醇与L-苯丙氨酸的计算公式
图3-1 2-苯乙醇与L-苯丙氨酸混合标准样品的液相图谱
3.2 2-苯乙醇与乙醇的含量测定
乙醇与2-苯乙醇混合标准样品的气相图谱，如图3-2。乙醇保留时间为2.490min，2-苯乙醇保留时间为6.408min；由公式（1）及图3-2确定了乙醇和2-苯乙醇的计算公式。
图3-2 乙醇与2-苯乙醇混合标准样品的气相图谱
3.3 木糖含量标准曲线的绘制
将木糖在106℃下烘箱干燥至恒重，配成1g/L标准溶液，如表3-1加入不同量标液于25mL具塞量筒中：
表3-1 溶液配制
管号 1 2 3 4 5 6
葡萄糖标准溶液（mL） 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
蒸馏水（mL） 1.0 0.6 0.2 0.8 0.4 0
DNS试剂(mL) 1 1 1 1 1 1
各试管分别加入表中试剂摇匀后，在沸水浴中加热5min。取出后用流水迅速冷却至室温。每管补加蒸馏水定容至刻度线，摇匀后在540nm波长下测OD值[23]。以木糖浓度为横坐标，以OD值为纵坐标绘制标准曲线。如图4所示：
图3-3 木糖浓度标准曲线
3.4 菌种筛选
在摇床培养48小时后，取各发酵液进行分析其生产2-苯乙醇的能力，对选中的5种酵母菌株进行筛选。结果如图3-4所示。
图3-4 酵母菌株的2-苯乙醇产量对比
从图3-4中可知，在培养组成以及转化条件相同情况下，B菌株（梅山活性干酵母）与其他不同酵母菌株的转化合成的2-苯乙醇浓度差别非常明显，B菌株（梅山活性干酵母）的转化合成的2-苯乙醇浓度达到1.035g/L，而其他不同酵母菌株转化合成的2-苯乙醇浓度均在0.4-0.7g/L之间，所以本次研究所选用的菌种为梅山活性干酵母。
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