水稻响应赤霉素的小RNA鉴定与分析(4)
7) 取出胶后，根据Maker判断并切取10-30nt的小分子RNA，用枪头研碎胶块，在200μL左右的NaCl溶液（氯化钠水溶液，0.3mol/L）中浸泡过夜
8) 向体系中加入1/10体积的NaAc（醋酸钠，3mol/L）、2μL glycogen（糖原，10mg/ml）和2.5倍体积的无水乙醇（在-20℃预冷过），放置在-80℃冰箱沉淀过夜，取出后14000rpm 4℃离心1h，后弃上清液
9) 在沉淀中加入1ml的75%乙醇轻轻洗涤沉淀，风干后加入RNAase-free H2O溶解沉淀物，完成small RNA的胶回收
1．2．4 Small RNA的cDNA文库构建与测序
在纯化的small RNA片段上连上5’和3’接头，反转录合成第一条cDNA后跑15-20个PCR循环，完成文库构建。Solexa测序由华大基因公司完成。