竞争性种群模拟的质粒构建(3)
1.5pLuxRLasI质粒与pLuxILasR质粒简介
图1.1质粒pLuxRLasI
图1.2质粒pLasRLuxI
如图，质粒由卡那霉素抗性基因，lac启动子控制的luxR，lasI基因，lux Box控制的lacY基因三部分构成.
卡那霉素抗性基因，可表达卡那霉素抗性，位置后筛选工作提供便利。
luxI基因，可以控制合成AHL，AHL是海洋细菌费氏弧菌[1] ( Vibrio fischeri )的群体感应的信号分子，细菌在生长过程中将会不断分泌AHL，因此，环境中AHL的浓度可以说代表了菌体密度，当AHl的浓度达到一定阈值，即菌体密度达到一定阈值，AHL将会和r蛋白结合，形成R*蛋白。
luxR基因，控制合成R蛋白，当AHl的浓度达到一定阈值，即菌体密度达到一定阈值，R蛋白将会和AHL结合，形成R*蛋白。
Luxbox启动子，能够和R*蛋白结合，激活后续基因表达。
正如上面说到的，LasR，LasI，Lasbox也是相同的关系。
lacY基因控制乳糖在细胞膜上的通透性。由于最终等待转化的宿主细胞的lacY基因已被敲除，故质粒上的lacY基因是细胞能够在乳糖环境下生存的唯一依据。
1.6实验主要内容
本课题将构建一个竞争性生长的质粒，含有这个质粒的宿主细菌将在生长过程同合作，生产一种高丝氨酸信号分子，这种分子累积到一定浓度后将启动某一个基因表达，使细菌能够利用特定的营养物质，为种群开辟了新的生存空间。本课题的长远目标是以这种宿主菌为材料，研究菌群合作过程中欺骗行为的产生和蔓延规律，探寻合作行为得以保持的遗传学机制。
由于时间原因，本实验室本次试验主要操作内容为拼接质粒。即分别拼接出1.3内容中着重介绍的pLuxILasR，pLuxRLasI质粒。重组质粒是分子生物学基础而非常重要的手段之一。一种方法是使两个片段的两端分别具有可以互补配对的粘性末端，然后使用连接酶链接，转化到宿主内筛选检验。另一种方法是分别在两个片段的一端切出可以互补配对的粘性末端，然后进行overlap PCR，最终把两段拼接到一起，再把线性DNA环化为环状质粒。本次试验选择了前种方法。
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