miRn-17在秦川牛不同时期不同组织的时空表达研究(2)
2.5荧光实时定量PCR 6
2.5.1样品扩增及凝胶电泳检测 6
2.5.2 荧光定量[11] 7
3结果与分析 8
3.1 RNA检测 8
3.2 RNA样品检验 9
3.3 定量PCR 9
3.3.1定量PCR中的各对引物的溶解曲线 9
3.3.2 miRn-17在不同发育时期不同组织中的表达量 10
4讨论 12
结论 12
致谢 12
参考文献 13
引言
随着社会不断发展，人民生活水平不断提高，肉牛市场需求迅猛增加。我国肉牛养殖产业起步较晚，与国外专用于食用而饲养的肉牛品种相比具有生长速度较慢饲料转化率低等缺陷。所以，不断结合现代生物技术探究影响牛肌肉生长和肌肉品质的因素，并以此培养出优质新型肉牛品种，对我国黄牛繁殖产业具有重要意义。
在肉用牛生产中，肌肉特别是骨骼肌的生长状况是肉牛生产性能的重要影响因素。研究miRNA与秦川牛肌肉生长的关系，不仅可以为治疗和预防与骨骼肌有关的黄牛疾病提供科学的依据，更重要的是要弄明白miRNA与其靶mRNA信息的关系，诠释miRNA在牛的肌肉生长发育过程中的作用机制，并依据这些理论不断优化秦川牛生长过程中的肌肉生长速度和肌肉品质。
miRNA是一种大小约为21-23个核苷酸的调控性小RNA分子，microRNA是以控制mRNA剪切和抑制蛋白质翻译的方式进行负调控靶基因的[1]。近年来经过学者们的不断研究，证明在动物的全部基因中，miRNA大约参与了20%-30%的基因的表达调控[2]。越来越多的研究证明microRNA分子参与了机体发育，细胞分化，细胞凋亡，脂代谢和激素分泌等多种生物体内的生理过程。生物体内可能存在通过microRNA完成机体生理调控的调控网。依此依据，我们可以探究秦川牛肌肉生长与microRNA是否存在调控网络。
骨骼肌的生长过程涉及多个基因的表达,信号传导途径等等[3]。这是一个复杂的过程。因此，虽然骨骼肌的生长发育研究一直是生物学研究的焦点，但是至今还有很多生理机制尚不清楚。随着近几年的microRNA的研究和发展，发现了越来越多的microRNA参与了骨骼肌的增殖与分化的生理调控过程[4]。
Kwon等（2005）以功能缺失时microRNA的表达量变化和获得功能时的microRNA的表达量变化的方法证明果蝇的肌肉特异性古老基因miR-1通过对Notch信号途径成员的作用，起到调控心脏发生和文持肌肉的特异性表达的作用[5]。果蝇的发育研究过程发现，miR-1基因突变使肌肉前体细胞和心脏前体细胞分化受阻，能使幼虫在快速生长期出现严重的肌肉缺陷，从而导致突变体死亡。在骨骼肌中，miRNA-1以HDAC4为靶点促进肌肉发生，而miRNA-133通过抑制血清反应因子而控制成肌细胞增殖的速度，这表明二者参与了调节骨骼肌增殖与分化过程，并起着相当重要的作用[6]。
心肌和骨骼肌前体细胞特异表达基因miR-1-1与miR-1-2通过直接靶向SRF、MyoD和Mef2等因子来调节肌细胞的增殖过程，Zhao等（2005）用计算机预测方法鉴定出miR-1的新靶点Hand2，认为miR-1 通过对该靶点的作用而在心脏发生期间影响着肌细胞的增殖与分化过程[6]。最近的研究表明，let-7参与控制着C. elegans头部肌肉的发育过程。另外，Naguibneva等（2006）发现，在哺乳动物肌肉发育的成肌细胞分化期间，miR-181下调分化抑制因子Hox-A11的表达，从而影响肌肉表型[7]。