重组透明质酸酶包涵体复性及其酶解条件研究(3)
1.1.2 透明质酸酶的来源
透明质酸酶分布十分广泛，在哺乳动物、无脊椎动物、病原性真菌、细菌和噬菌体中
均有发现，而在哺乳动物组织中分布差别也使透明质酸酶的活性及性质有区别。
（1） 哺乳动物来源透明质酸酶
通过对于人类基因组的检测，其有6种透明质酸酶基因，而这些透明质酸酶基因的相似性在33%-42%左右[7]。目前，关于人类透明质酸酶的研究主要集中在在Hyal-1、Hyal-2这两种透明质酸酶。其中，经实验发现，Hyal-1是一种酸性糖蛋白，通常分布在哺乳动物的肝、肾、脾还有心脏中[8] ，大小约为57kDa。它能够降解各种不同分子量水平的透明质酸，反应的终产物为四糖[9]。而Hyal-2则存在于溶酶体中，可以调节透明质酸的分解代谢，最终将哺乳动物的透明质酸分解成大小约为20kDa左右的片段[10]。实验证明，该酶的最适反应pH为4。在哺乳动物中，透明质酸酶降解透明质酸的机制是非常清晰的的，一般先由Hyal-2降解透明质酸，然后由Hyal-1催化透明质酸，得到的反应最终产物为四糖[11]。目前，哺乳动物来源透明质酸酶在大量的研究中得到使用，其主要来源是牛睾丸透明质酸酶，而实验结果表明，哺乳动物来源透明质酸酶的反应终产物一般都是四糖[12]。
（2） 动物毒液来源透明质酸酶
在许多动物毒液中都有发现透明质酸酶的存在[13]，目前在蜜蜂、蛇、蜘蛛、玫瑰毒鲉等动物毒液中均检测到了透明质酸酶的活性[14]，其中，蜜蜂毒液透明质酸酶(BVH)是首个使用cDNA克隆技术，通过在原核生物大肠杆菌表达最终得到的动物毒液来源透明质酸酶[15]。经检测，该酶是一种由349个氨基酸构成的大小约为40.746kDa的糖蛋白，其糖含量在7%左右[16]，其反应终产物是四糖。Markovic-Housley等[17]将蜜蜂毒液透明质酸酶与透明质酸四聚体合成结晶，从晶体分析的结果来看，蜜蜂毒液透明质酸酶与透明质酸的结合位点在C末端。此外，另一种动物来源透明质酸酶——虎头蜂毒液中的透明质酸酶经过cDNA克隆后测定其基因序列，结果显示为共有331个氨基酸分布在该酶中。该结果与蜜蜂毒液透明质酸酶的序列的相似程度约在56%左右[18]。而首个从海洋生物中提取到的透明质酸酶是从毒鲉科的石鱼中提取得到的[19]。研究发现，该酶的大小约为62kDa，而且本身并不具有毒性，是一种N-乙酰氨基-β-内切己糖甘酶，通过作用于β-1,4糖苷键来降解透明质酸，其反应终产物是四糖[20]。2012年，在印度的一种蛇类——蛇角蝰中分离得到了一种新型的大小约为33kDa的透明质酸酶，实验表明，该酶的最适酶解条件为pH5.5，37℃[21]。
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