一株红曲霉菌功能特性及其在制曲中的应用(3)
产纤文素酶固体培养基[9] ：磷酸氢二钾 0.5 g，硫酸镁4 0.25 g，纤文素粉1.88 g，刚果红0.20 g，琼脂20 g，加蒸馏水至800 mL，调整pH值为7.0后，补充到1000 mL。
1.2 主要仪器与设备
梅特勒-托利多仪器有限公司生产的型号为PL601-L的电子天平；上海一恒科技有限公司生产的LRH系列的生化培养箱；上海一恒科技有限公司生产型号为SYQ-DSX-280B的不锈钢压力蒸汽灭菌器；北京科伟永兴仪器有限公司生产的101-型电热鼓风干燥箱；苏净集团苏州安泰空气技术有限公司生产的SW-CJ-2FD型洁净工作台；河南新飞电器有限公司生产的BC/BD-426HY冰柜；上海一恒科学仪器有限公司生产的HZQ-X300恒温振荡器。
1.3 主要试验方法
1.3.1 红曲霉菌分离纯化与菌种鉴定
1.3.1.1 红曲霉菌株的分离与纯化
分离[11]：取5 g红曲米放入装有45 mL无菌水的100 mL三角瓶中，在35℃、150 r/min恒温振荡器震荡15 min进行活化，此浓度为10-1；用移液枪吸取1 mL加入到盛有9 mL的无菌水，震荡摇匀，此为浓度为10-2；依次进行梯度稀释，到10-5。用移液枪吸取10-3、10-4、10-5三个梯度1 mL打入麦芽汁平板培养基中，用涂布涂匀，每个梯度两个平行。30℃培养3~5d。
纯化:用接种环挑取单菌落，在麦芽汁平板上划线，30℃培养3~5 d。
1.3.1.2 红曲霉菌形态观察与菌种鉴定
采用载玻片湿室培养法[12]：准备湿室：在培养皿底部铺一张圆形滤纸片，滤纸片上依次放上“U”玻璃片搁架、载玻片、盖玻片（两片），盖上皿盖，外用纸包扎，121℃灭菌20 min。取菌接种：接种环挑取孢子，轻轻在载玻片上碰几下，接种量要少，同一载玻片接种两处。加培养基：用移液枪吸取少量融化冷却45℃豆芽汁培养基滴到接种处，直径约为0.5 cm。④加盖玻片：待培养基凝固前，用无菌镊子将盖玻片盖上，轻轻按压，要求盖玻片与载玻片之间留有小缝隙。⑤到保湿剂：倒入约3 mL20%的无菌甘油，使滤纸完全湿润，盖上皿盖，30℃培养。⑥观察：定时用显微镜观察红曲霉菌生长情况，取16 h、24 h、32 h、48 h、72 h时间点。
1.3.2红曲霉菌的发酵功能研究
1.3.2.1红曲霉菌产酶功能研究
选择不同的产酶固体培养基培养5 d，采用透明圈法考察红曲霉菌的产淀粉酶、产蛋白酶、产酯化酶、产纤文素酶的产酶功能。
1.3.2.2 红曲霉在麦芽汁培养基发酵功能
选择麦芽汁液体培养基培养5 d，测定红曲霉菌的产酸、产色素、 产酯化酶和糖化酶活力。
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