玫瑰茄有效成分的提取及护肤功效评价(5)
(2) 超声波-乙酸乙酯提取法
玫瑰茄花萼3g 淡黄色萃取液 150mL圆底烧瓶 表面皿 淡黄色萃取物 干燥，保存。
注意：在超声波-95%乙醇和超声波-乙酸乙酯提取法提取玫瑰茄粗提物时，95%乙醇溶液和乙酸乙酯加入量分别根据料液比为1:4,1:5,1:7,1:10,1:15,1:20来确定。
提取率的公式为：
提取率=(m/M)×100% （2.1）
式中m为干燥粗提物的质量，M为原料的质量。
2.2.2 玫瑰茄粗提物的抗氧化性测定
抗氧化效果的体外评价主要包括清除自由基能力的测定与成纤文细胞体外增殖能力检测。根据自由基伤害理论，自由基过量产生是导致皮肤自然衰老和光致老化的主要原因。减少自由基的产生和清除老化代谢产物已成为目前延缓皮肤衰老的有效方法。因此，是否具有清除自由基的能力是评价抗衰老化妆品(原料)的重要指标之一。目前评价清除自由基的能力的指标主要有：清除二苯代苦酰基自由基能力、清除超氧阴离子能力、清除羟自由基能力。本实验采用的是清除二苯代苦酰基自由基能力和清除羟自由基能力的方法进行测定。
(1) 清除DPPH自由基法
DPPH法于1958年被提出，广泛用于定量测定生物试样和食品的抗氧化能力。此法是根据DPPH在有机溶剂中是一种稳定的自由基，其醇溶液呈紫色，具有单一电子，故能接受一个电子或氢离子，在波长为517nm下具有最大吸收。有自由基清除剂存在时，DPPH的单电子被捕捉而使其颜色变浅，在最大光吸收波长处的吸光值下降，且下降程度呈线性关系，吸光度水平的降低表明抗氧化性的增加，从而以评价试验样品的抗氧化能力。分别研究超声波-95%乙醇提取液、超声波乙酸乙酯提取液的抗氧化性，以BHT做对照。
该反应体系所需溶液为DPPH溶液2ml、待测玫瑰茄样品溶液2ml均匀混合，在暗处静置30分钟，在517nm处测定其吸光度的变化，待测玫瑰茄样品的浓度分别为0.2mg/mL，0.4mg/mL，0.6mg/mL，0.8mg/mL，1.0mg/mL，自由基清除率d计算方法如下：
d(%)=[1-(Ai-Aj)/Ac] × 100% (2.2)
式中，Ac为2ml乙醇加2mL DPPH溶液的吸光度，
Ai为2ml待测液加2mLDPPH溶液的吸光度,
Aj为2 mL待测液加2 mL乙醇的吸光度。
(2) 清除羟自由基法
清除羟自由基的测定方法原理为：双氧水/亚铁离子体系通过Fonton反应产生羟自由基，邻二氮菲-亚铁离子水溶液因被羟自由基氧化为邻二氮菲-铁离子，在510nm波长处的吸光度降低。邻二氮菲-亚铁离子为红色络合物，在510nm波长处有吸收峰，而邻二氮菲-铁离子在510nm波长处的吸收峰及其微弱，可忽略。分别研究超声波-95%乙醇提取液、超声波乙酸乙酯提取液的抗氧化性，以BHT做对照。
该反应体系所需溶液及试剂为PBS缓冲液2mL、邻菲罗啉0.5mL、FeSO4溶液0.6mL、双氧水0.2mL、待测玫瑰茄粗提液、去离子水定容至10mL，室温下静置30min,测定其在波长为510nm处的吸光度，待测玫瑰茄样品的浓度分别为0.2mg/mL，0.4mg/mL，0.6mg/mL，0.8mg/mL，1.0mg/ml，羟自由基清除率d计算方式如下：
下一篇：生物法制备天然烟用香料+文献综述