1.3 测量相关指标
  1.3.1 镉含量的测定
分别称取0.1g地上部分和根部干样,于5 ml HNO3的体系中进行微波消解35 min,随后用蒸馏水将溶液定容至25 ml备用。用5 % HNO3配制Cd的标准曲线,使用仪器ICP-MS(Optima 2100 DV,PerkinElmer Waltham,MA,USA)测定镉含量。
  1.3.2 叶绿素含量的测定
小白菜幼苗处理10 d后,每组称取0.2 g新鲜叶片剪碎,用95 %乙醇浸提过夜,然后分别测定浸提液在665 nm、649 nm及470 nm处的吸光值,代入公式即可算得光合色素浓度(ug/ml),公式如下[4]:   
叶绿素a(Chl a)=13.95 * OD665 - 6.88 * OD649
叶绿素b(Chl b)=24.96 * OD649 - 7.32 * OD665
类胡萝卜素(Car)=(1000 * OD470 - 2.05 * Chl a - 14.8 * Chl b)/ 245
  1.3.3超氧化物歧化酶(SOD)活性测定
1.试剂的配制
(1)0.05 mol/L磷酸缓冲液(PBS,pH7.8):
 A母液:0.2 mol/LNa2HPO4溶液:取Na2HPO4•12H2O(分子量358.14)71.7 g;
 B母液:0.2 mol/LNaH2PO4溶液:取NaH2PO4•2H2O(分子量156.01)31.2 g。
分别用蒸馏水定容至1000 ml。
(2)0.05 mol/L PBS(pH 7.8):将228.75 ml A母液和21.25 ml B母液混合,用蒸馏水定容至1000 ml。
(3)14.5 mM甲硫氨酸溶液:用PBS将2.164 g Met定容至1000 ml。
(4)30 μM EDTA-Na2溶液:用PBS将0.001 g EDTA-Na2定容至100 ml。
(5)60 μM核黄素溶液:用PBS将0.0023 g核黄素定容至100 ml(保存需避光)。
(6)2.25 mM 氮蓝四唑(NBT)溶液:用PBS将 0.184 g NBT定容至100 ml(保存需避光)。
2.酶液制备:取1.6 ml PBS并与研钵一起预冷,再取0.2 g洗净的样品加入其中研磨均匀,4℃下12000 g离心20 min,上清液即为酶液。
3、酶活性测定
(1)反应混合液配制:将5.4 ml PBS,162 ml甲硫氨酸溶液,0.6 ml EDTA-Na2溶液,6 ml核黄素溶液,6 ml氮蓝四唑溶液混合并摇匀;
(2)分别取100 μl酶液和3 ml反应混合液于试管中;
(3)使用光照培养箱,让试管在4000 lux的环境下反应20 min;(要选择相同规格的试管,保证试管透光率相同,这个最好分组做,一组一个重复,一组完就做好所有的处理,且都要有一个最大管放在中间)
同时配置一份只有缓冲液的试管置于暗中,作为调零对照管。
(4)以不照光的对照管调零后,测定OD560(在无光环境下出现颜色即可)。
(5)酶活性计算:SOD活性单位以抑制NBT光化还原50 %所需的酶量为1个酶活单位(u)。
SOD总活性= [ ( ACon-AE ) × V] /(1/2 ACon × W × Vt)(u/g FW)[5]
SOD比活力=SOD总活性/蛋白质含量
SOD总活性以鲜重酶单位每克表示(u/g FW);SOD比活力单位以酶单位每毫克蛋白表示;ACon为照光对照管的吸光度;AE为样品管的吸光度;V为样品液总体积;Vt为测定时的酶液用量;W为样品鲜重(mg);蛋白质含量单位为mg / g。
  1.3.4过氧化物酶(POD)活性测定
  1、试剂配制:
(1)0.2 mol/L PBS(pH 6.0):将123 ml A母液和877 ml B母液定容至1000 ml。
(2)反应混合液配制:取200 ml PBS(0.2 M,pH 6.0),加入0.076 ml液体(原液)2-甲氧基酚加热搅拌溶解,待溶液冷却,加入0.112ml 浓度为30 %的H2O2,混合均匀。
  2、样品测定:将100 μl酶液加入3 ml反应液中,用磷酸缓冲液调零,测定OD470值,40s后重新测定。
  3、酶活性计算:以每分钟OD值升高0.01为1个酶活性单位(u)。
POD=(ΔA470 × Vt)/(W × Vs × 0.01 × t)(u/g min)[5]
ΔA470:为反应时间内吸光度的变化;W为样品鲜重(g);t为反应时间(min);Vt为提取酶液总体积;Vs为测定时取用酶液体积。
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