在对骨豁硬化(op/op)基因突变小鼠的研究中发现,对于缺少CSF1的小鼠来说,会患有破骨细胞缺陷的骨硬化,通过关节置换手术,对于CSF1缺陷的小鼠来说,其关节滑液中存在高浓度的CSF1,而且巨噬细胞和单核吞噬细胞表面存在CSF1受体,就会产生破骨细胞[7]。

Lee[8]等通过一系列实验表明,在正常小鼠中,体内存在CSF1,颅骨细胞和骨髓细胞放在一起培养之后,可以生成破骨细胞,但是在CSF1缺陷的小鼠中,要想生成一定数量的破骨细胞,需要在培养基中额外加入CSF1。

一系列骨豁硬化(op/op)基因突变小鼠的实验,确定了CSF1在OC(破骨细胞)分化中起着至关重要的作用。op/op基因突变的小鼠可以作为一种模型,代表的是小鼠骨豁硬化症,该疾病是因为该机体骨吸收的作用减弱而造成的[9]。各研究小组都通过研究发现,在op/op基因突变的小鼠中,都是因为突变型CSF1的表达量降低,从而引起破骨细胞缺陷[10-11]。

Yoshida等[12]研究发现,在op/op基因突变小鼠的基因中,发现在CSF1的基因编码区内,有一个突变点,这个突变点导致蛋白质的合成提前终止,不能产生CSF1而造成骨豁硬化。有研究证明,骨豁硬化症可以用重组的CSF1进行治疗,CSF1对于破骨细胞前体的增殖、分化,都起到相当重要的作用[13-16]。

CSF1具有多种生物学功能,因此而受到生物界广泛的重视。临床上也反馈,CSF1在对破骨细胞的调节、肿瘤的治疗都有很重要的意义[17]。

通过这次实验,要证明北京义翘神州生物技术有限公司,生产出的CSF1单克隆抗体,具有良好的生物活性,并且在肿瘤治疗方面能起到积极疗效。

1.实验材料及试剂

1.1实验材料

M-NFS60:为依赖rhMCSF(recombination human MCSF)的小鼠粒白血病细胞株,购自美国ATCC公司。mCSF1抗体(mouse CSF1 Antibody),mCSF1(mouse CSF1),CSF1(CSF1),来自义翘神州生物技术有限公司。

1.2实验仪器

表1实验仪器

名称 生产厂家 型号

东亚牌液氮容器 乐山东亚机电工贸有限公司制造 yDS-100-200C

CO2培养箱 Thermo Fisher Scientific 3112

紫外分光光度计 Thermo ND-2000C

酶标仪 Thermo MK3

倒置显微镜 尼康仪器(上海)有限公司 XDS-2B

生物安全柜 上海瑞仰净化装备有限公司 BBS2A2-1612

混旋器 海门其林贝尔 QL-905

1.3实验试剂

1.3.1 培养基

1640培养基,义翘神州生物技术有限公司提供。

胎牛血清(FBS),从Gibco公司购买,-20℃保存,使用前灭活,灭活为了除掉血清补体里的敏感物质,减少支原体污染的风险。

M-NFS60培养基(1640+10%FBS+0.05mM β-ME+62ng/mL CSF1),取10mL的FBS加到90mL的1640培养基,再加入体积100μL 50mMβ-巯基乙醇和62ng/mL 人CSF1。

实验培养基(1640+10%FBS+0.05mM β-ME),取10mL的FBS加到90mL的1640培养基,再加入体积100μL 50mMβ-巯基乙醇,不加CSF1因子。此实验培养基也作为样品的稀释液。

1.3.2 显色剂

0.4%台盼兰,称0.4g台盼蓝的粉末加入到三角烧瓶中,源Z自+优尔=文@论(文]网[www.youerw.com,源Z自+优尔=文@论(文]网[www.youerw.com,搅拌溶解6h以上,待其充分溶解后,用0.20µm滤膜过滤除菌,室温保存即可。

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