含有非脯氨酸的DKP的合成+文献综述(3)
由于脯氨酸是唯一通过自然生化途径形成了羟胺键的成肽基团，使得含有脯氨酸 残基的环肽具有一定特殊性，如含脯氨酸基团的环二肽一般颜色较深，呈淡黄色或黄色，熔点较低，通常在200℃以下，在实验中要注意。
1.1.3 环二肽的波谱分析
环二肽的红外光谱在3400～3200cm-1和1700～1650cm-1显示NH和C=O的吸收峰。在核磁共振谱中，1H-NMR 低场区(D7.8～8.3)一般出现两个酰胺质子信号，13C-NMR谱中低场区(D165～170)处通常有两个酰胺羰基碳信号［13］。完成含非脯氨酸的DKP的合成以后，利用液相色谱与质谱联用技术对所得的环二肽的构型进行分析研究，分离DKP的非对映异构体，同时利用红外光谱，CD光谱，计算机模拟，核磁共振鉴定其构型。
1.1.4 环二肽的生物活性
环二肽的分子结构和活性具有稳定性、独特性和新颖性的优点，因此在医药、食品及天然产物开发研究等众多的领域中具有广阔的应用前景。如它可作为活性先导化合物，在寻找蛋白作用位点，药物靶点等方面扮演重要的角色。研究表明环二肽的生物活性主要表现在以下几个方面。
环二肽具有抑菌、抗癌、抑制或促进心血管系统的作用、保护神经元及改善脑功、脱瘾与解毒、参与信号传递的生物活性，因此，环二肽在抗生素、抗肿瘤抑制剂、抗凝血剂、神经保护剂、益智剂以及脱瘾剂等药物研发中有一定的应用价值。
1.2 环二肽的合成方法
1.2.1 溶液相合成环二肽
其合成环肽可直接反应，即将脱保护后的线型肽前体直接在缩合试剂的缩合下成环，也可先将一端(一般为C 端) 活化，然后成环。经典的液相环化反应的主要问题是环寡聚化反应及环二聚化作用，一般用高度稀释的方法解决。
1）活泼酯法 它是目前发现的肽环化反应中最简便的。将羧基制成活泼酯脱去N端保护基然后成环。活泼酯法有硝基苯酯法(ONP) ， N-羟基琥珀酰亚胺法(OSu) 和五氟苯酯法(Pf P) 等。但活泼酯的立体效应大，使得反应活性不高，环化速度减慢，可能会引起消旋。
2）叠氮法 将羧端制成酰基叠氮活泼中间体，在稀释的碱性溶液中成环。此法引起消旋可能性小，合成效率高，但是酰基叠氮中间体不稳定，叠氮酸有毒，制备步骤繁琐。
3）混合酸酐法 将羧端制成混合酸酐, 然后在稀释的碱性溶液中成环，由于活
泼中间体极不稳定，所以在制备酸酐时要严格保持低温，使用的仪器、溶剂必需绝对干燥。
4）直接法 制备的过程中，线型肽不必制成中间体，只在两端游离的线型肽稀溶液中加入有效的缩合试剂缩合，直接成环。
5）硫酯法 其合成环肽与一般的溶液法不同，主要表现为两点： 一是线型多肽的侧链除氨基、巯基外其它官能团可不必保护；二是克服了反应必须在低浓度下进行的缺点。先用固相法合成C 端为硫酯的线型肽, 将其从树脂上裂解下来，然后在溶液中环化。溶液中加入有一定络合能力的金属离子(Ag + , Cu2 + , Hg2 + )， 由于金属离子对S , N , O 的亲和顺序为S> N >O , 使N 端与C 端靠近, 最后S 与金属离子络合从C 端脱下，N 端与C 端成环。通过调节缓冲溶液的pH 值可以使产率在比较高的反应液浓度下(20 mmol/ L) 达到50 %～60 % ，且没有聚合物生成。
1.2.2 固相合成法
其先在树脂上环化，然后脱落下来，这样就避免了分子间的聚合，也不必在高度稀释的溶液中进行反应，并且过量的缩合试剂及副产物可通过洗涤与过滤除去。固相合成常用MBHA , Oxime 和PAM 等树脂，树脂上的活性基团是肽链形成的关键。近年来随着较温和的正交保护策略的发展和有效的缩合试剂的出现以及分离手段的不断发展，越来越多的人倾向用固相法合成环肽，尤其是用于中环肽的合成。其具体的合成步骤如下：氨基酸的C端通过连接臂苯甲酰酯键与载体聚苯乙烯珠与相连，然后脱掉Boc保护基，再与另一分子的氨基酸耦合形成保护的直链二肽，再脱保护基分子内氨解环化形成环二肽，从树脂上裂解下来。