（1）通过微生物分离和纯化分离筛选出红曲菌和乳酸菌。 

（2）对菌株去除 AFB1 能力进行研究。 

（3）对菌株去除 AFB1 机制进行初步研究。

2  微生物发酵产品去除 AFB1

    去除 AFB1 的三种方法中，从去除效果及各种方法的优缺点来说，生物法是最佳选择。而 在生物法去除 AFB1 的具体方法中，微生物去除具有良好的应用前景。因此本实验将目光放在 了我们身边的微生物发酵产品。日常生活中有很多食品微生物，它们对我们人体友好，能够 吸附累积在我们体内的毒素。因此，考察这类微生物对 AFB1 的去除效果比其它微生物更明 智。 

2。1 实验材料及仪器文献综述

2。1。1  实验材料

老才臣大块红腐乳、泡菜、土豆（均购自苏果超市）。

2。1。2  实验试剂

AFB1 ELISA 快速检测试剂盒（购自北京华安麦科生物技术有限公司）、AFB1 母液（购自 美国 sigma 公司，实验室已配置，浓度为 3125μg/mL）、甲醇、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氯 化钠、氯化钾、浓盐酸、去离子水等。

PBS 缓冲溶液（pH=7。4）配制：0。27g 磷酸二氢钾、1。42g 磷酸氢二钠、8g 氯化钠、氯化 钾 0。2g。加足量去离子水充分搅拌溶解，然后加入浓盐酸调 pH 至 7。4，最后定容到 1L， 121℃灭菌 20min  后置于 4℃冰箱保存待用。

2。1。3  实验仪器

实验主要仪器如下表 2。1 所示：

表 2。1 实验主要仪器

仪器 型号 厂家 

Sanyo 自动高压蒸汽灭菌锅 MLS-3020 日本三洋 

洁净工作台 SW-CJ-1CU 苏净集团安泰公司 

移液器 单道、多道多规格 美国 Thermo 公司 

Multiskan Go 全波长酶标仪 1510 美国 Thermo 公司 

低速离心机 TDSA-WS 湖南湘仪实验室仪器开发有限公司

混匀振荡器 MSC200 杭州奥盛仪器有限公司 

低温培养箱  LRH-100 上海新苗医疗器械制造有限公司 

电子天平 YP3001 上海良平仪器仪表有限公司 

2。2 方法和步骤

2。2。1 含 AFB1 的 PBS 缓冲溶液配制

取 AFB1 母液 32µL 加入配好的 PBS 缓冲溶液，定容至 200mL，从而将 AFB1 的浓度由

3125μg/mL 稀释到 500µg/kg，然后在 80℃恒温水浴锅中加热 10min，置于 4℃冰箱中备用。

2。2。2 实验样品预处理

将从苏果超市购买的红腐乳和泡菜在洁净工作台上取少许于无菌试管中，各加入足量无 菌水，震荡摇匀。10 倍稀释后将含腐乳的混合液分装在 A、B 两只试管中；将含有泡菜的混 合液分装在 C、D 两只试管中，每只试管含混合液 22。5mL。另取一只无菌试管加入 22。5mL 无菌水作对照。对试管 B、D 进行 121℃灭菌 20min 处理。如图 2。1 所示。

实验样品预处理示意图（B、D 灭菌处理）来*自-优=尔,论:文+网www.youerw.com