β-葡聚糖主要源于一些食品如啤酒酵母、燕麦、食用菌等，是市售的热点功 能性食品，它是一种多糖，其主要化学结构类型有β-1，3 葡聚糖和β-1，6 葡聚 糖。其中β-1，3 葡聚糖具有抗肿瘤的性质，在降血脂、降血糖、和预防心血管 疾病、提高免疫能力等方面都有着出色的表现。研究显示β-葡聚糖具有很好的免 疫调节的能力。β-葡聚糖能显著恢复环磷酰胺处理后小鼠外周血液中白细胞、淋 巴细胞的数量；调控与免疫相关基因的表达活跃度，并增强某些细胞因子的表达； 一定程度上可缓解环磷酰胺对机体免疫功能以及造血功能的抑制。β-葡聚糖具备 的许多免疫调节功能，包括激活免疫细胞（巨噬细胞、单核细胞、树突状细胞等）、 诱发 NO 的合成、调控免疫反应相关的信号通路及细胞信号传递、削减电离辐射 给机体的免疫力带来损伤、还能增进免疫球蛋白合成等[38]。

南京理工大学分子代谢中心采用胞外可溶性β-葡聚糖——索拉胶，研究其对 酒精、CCl4 诱导的免疫性肝损伤小鼠的保护作用，该糖是由本实验室分离的一种 新型的土壤杆菌 Agrobacterium sp．ZX09 产生的。首先通过给 PBS 和索拉胶预 处理 4 天的小鼠灌食酒精，建立了急性的酒精性肝损伤小鼠模型；结果显示，索 拉胶预处理组小鼠的血清 ALT、AST 水平明显低于 PBS 组小鼠[39]。肝脏病理组 织切片结果显示，相比在 PBS 组小鼠肝内发生的脂质堆积，索拉胶组小鼠肝内 的脂质含量明显削弱。在 CCl4 诱导的肝损伤小鼠模型中，接受索拉胶预处理 3 天的小鼠在注射 CCl4 24h 和 48h 后血清的 ALT、AST 活性明显低于 PBS 组小鼠。 肝脏的病理组织切片显示，接受索拉胶预处理组的小鼠初期的肝细胞变性及坏死

本科毕业设计说明书 第 5   页 较 PBS 组得到了明显的好转，机制研究发现索拉胶可以通过缓解胞内氧化压力 及加速后期肝细胞增生发挥保护效应[40]。

1。5 实验研究的主要内容和意义

ConA 诱导的自身免疫性肝炎模型是目前广泛采用的小鼠肝损伤模型，为治 疗药物的筛选提供了较好的平台。索拉胶是本实验室新发现的一种β葡聚糖，具 有广泛的免疫调节功能，尤其是肝损伤保护功能，然而它对 ConA 诱导的自身免 疫性肝炎的保护作用仍有待于进一步研究。本课题主要采用 ConA 诱导小鼠肝损 伤的模型，通过对其血液及肝脏等相关指标的测定，研究一种新型的β-葡聚糖索 拉胶能否对 ConA 诱导的肝损伤起保护作用，并对保护的机制进行进一步探讨， 为潜在治疗药物的开发提供实验基础。

2。 材料与方法

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2。1 试剂

索拉胶，PBS，ConA，福尔马林，乙醇，二甲苯，石蜡，苏木精，伊红（南 京基天生物公司），TRIzol，氯仿，异丙醇（国药集团化学试剂公司），DEPC 水， Oligo dT18，dNTP，Reaction Buffer，逆转录酶，灭菌超纯水，2×SYBR Green PCR master mix，GAPDH、TNF-α、IL-1β、IL-6、Atg5、Atg7、Bax、Bak、Bcl-2、 Bcl-xl 的上下游引物，400 目筛网，40% Percoll，CD3、CD4、CD8、CD44、CD19、 F4/80、Gr-1、CD11b 等流式抗体（eBioscience）。

2。2 仪器

10ml  注射器，丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)的微型试剂盒