1. 材料与方法
1.1 实验材料
周麦18
1.2 方法
1.2.1 小麦幼苗培养
小麦种子经5%的次氯酸钠消毒20-30 min后用蒸馏水多次冲洗,然后在蒸馏水中浸泡24 h后土培(室温),定期浇水,直至长出3片真叶为止。
1.2.2 外源文生素、盐胁迫液的配制
盐胁迫溶液的制备:取Na2CO3 7.95 g,加入适量水溶解,然后移入1000 ml容量瓶中加水定容至1000 ml,即可配制出75 mmol/l溶液。保存备用。
外源文生素溶液的制备:取复合文生素B片碾碎,称量80 mg,同法即配制出80 mg/l的外源文生素溶液。
1.2.3 盐胁迫处理
待小麦幼苗长出3片真叶,每天用注射器定量(50 ml)缓慢注入小麦根部75 mmol/l的盐溶液,对照则注入等量清水。连续处理7 d,保证被选幼苗的形态、长势、大小基本一致。苗期管理采用常规方法。对照组设定为第①组,盐胁迫组设定为第②组。对照组和盐胁迫组均于7 d后测定叶片中叶绿素含量、丙二醛含量、游离脯氨酸含量、可溶性糖含量、可溶性蛋白含量和过氧化物酶活性等指标。
1.2.4 紫外线胁迫处理
紫外光处理:在实验材料上方并排悬挂2个40W的紫外灯(313nm),实验中通过调整紫外灯与实验材料之间的距离,使株顶紫外强度保持在0.4W•m-2,紫外辐射剂量采用UV辐照计(北京师范大学光电仪器厂)测定。
将需要进行UV照射的小麦幼苗放在紫外灯下,每天UV照射小麦幼苗4 h,连续照射7 d,对照则于正常光照下培养。紫外线胁迫组设定为第③组。测定指标同上。
1.2.5 紫外线和盐复合胁迫处理
对长出3片真叶的小麦幼苗同时进行紫外线和盐胁迫处理,胁迫方法同1.2.3和1.2.4所述。紫外线和盐复合胁迫组设定为第④组。测定指标同上。
1.2.6 外源文生素处理
    待小麦长出3片真叶,在进行紫外线胁迫、盐胁迫、紫外线和盐复合胁迫的同时,用80 mg/l的外源文生素B溶液,每天在距根部约2 cm处用注射器进行文生素注根初始诱导,每天注射1次,每次每盆50 ml,4 d后用手持喷雾器喷施叶片进行文生素强化诱导,每天喷施1次,每次每盆60 ml,连续喷施3 d。将文生素+对照处理设定为第⑤组,文生素+紫外线处理设定为第⑥组,文生素+盐处理设定为第⑦组,文生素+紫外线与盐复合处理设定为第⑧组。测定指标同上。
1.2.7 各种生理指标的测定方法
(1)叶绿素含量的测定
采取丙酮无水乙醇混合液提取法,即分光光度法[14]测定叶绿素的含量,测定时设置3个重复,最终含量用平均值表示。
(2)游离脯氨酸含量的测定
采取酸性茚三酮显色法[15]测定游离脯氨酸含量,测定时设置3个重复,最终含量用平均值表示。
(3)丙二醛(MDA)含量的测定
采取Sun等[16]的方法测定丙二醛(MDA)含量,测定时设置3个重复,最终含量用平均值表示。
(4)可溶性糖含量的测定
采用蒽酮法[17-18]测定可溶性糖含量,测定时设置3个重复,最终含量用平均值表示。
(5)可溶性蛋白含量的测定
采取考马斯亮蓝法[18]测定可溶性蛋白含量,测定时设置3个重复,最终含量用平均值表示。
(6)过氧化物酶活性的测定
采用愈创木酚比色法[18]测定过氧化物酶活性,以470 nm波长下每分钟每克料的光密度变化表示酶活性的大小,测定时设置3个重复,最终含量用平均值表示。
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