外源维生素对紫外线与盐胁迫下小麦幼苗生长及生理代谢的影响(2)
1. 材料与方法
1.1 实验材料
周麦18
1.2 方法
1.2.1 小麦幼苗培养
小麦种子经5%的次氯酸钠消毒20-30 min后用蒸馏水多次冲洗，然后在蒸馏水中浸泡24 h后土培（室温），定期浇水，直至长出3片真叶为止。
1.2.2 外源文生素、盐胁迫液的配制
盐胁迫溶液的制备：取Na2CO3 7.95 g，加入适量水溶解，然后移入1000 ml容量瓶中加水定容至1000 ml，即可配制出75 mmol/l溶液。保存备用。
外源文生素溶液的制备：取复合文生素B片碾碎，称量80 mg，同法即配制出80 mg/l的外源文生素溶液。
1.2.3 盐胁迫处理
待小麦幼苗长出3片真叶，每天用注射器定量（50 ml）缓慢注入小麦根部75 mmol/l的盐溶液，对照则注入等量清水。连续处理7 d，保证被选幼苗的形态、长势、大小基本一致。苗期管理采用常规方法。对照组设定为第①组，盐胁迫组设定为第②组。对照组和盐胁迫组均于7 d后测定叶片中叶绿素含量、丙二醛含量、游离脯氨酸含量、可溶性糖含量、可溶性蛋白含量和过氧化物酶活性等指标。
1.2.4 紫外线胁迫处理
紫外光处理：在实验材料上方并排悬挂2个40W的紫外灯（313nm），实验中通过调整紫外灯与实验材料之间的距离，使株顶紫外强度保持在0.4W•m-2，紫外辐射剂量采用UV辐照计(北京师范大学光电仪器厂)测定。
将需要进行UV照射的小麦幼苗放在紫外灯下，每天UV照射小麦幼苗4 h，连续照射7 d，对照则于正常光照下培养。紫外线胁迫组设定为第③组。测定指标同上。
1.2.5 紫外线和盐复合胁迫处理
对长出3片真叶的小麦幼苗同时进行紫外线和盐胁迫处理，胁迫方法同1.2.3和1.2.4所述。紫外线和盐复合胁迫组设定为第④组。测定指标同上。
1.2.6 外源文生素处理
待小麦长出3片真叶，在进行紫外线胁迫、盐胁迫、紫外线和盐复合胁迫的同时，用80 mg/l的外源文生素B溶液，每天在距根部约2 cm处用注射器进行文生素注根初始诱导，每天注射1次，每次每盆50 ml，4 d后用手持喷雾器喷施叶片进行文生素强化诱导，每天喷施1次，每次每盆60 ml，连续喷施3 d。将文生素+对照处理设定为第⑤组，文生素+紫外线处理设定为第⑥组，文生素+盐处理设定为第⑦组，文生素+紫外线与盐复合处理设定为第⑧组。测定指标同上。
1.2.7 各种生理指标的测定方法
(1)叶绿素含量的测定
采取丙酮无水乙醇混合液提取法，即分光光度法[14]测定叶绿素的含量，测定时设置3个重复，最终含量用平均值表示。
(2)游离脯氨酸含量的测定
采取酸性茚三酮显色法[15]测定游离脯氨酸含量，测定时设置3个重复，最终含量用平均值表示。
(3)丙二醛（MDA）含量的测定
采取Sun等[16]的方法测定丙二醛（MDA）含量，测定时设置3个重复，最终含量用平均值表示。
(4)可溶性糖含量的测定
采用蒽酮法[17-18]测定可溶性糖含量，测定时设置3个重复，最终含量用平均值表示。
(5)可溶性蛋白含量的测定
采取考马斯亮蓝法[18]测定可溶性蛋白含量，测定时设置3个重复，最终含量用平均值表示。
(6)过氧化物酶活性的测定
采用愈创木酚比色法[18]测定过氧化物酶活性，以470 nm波长下每分钟每克料的光密度变化表示酶活性的大小，测定时设置3个重复，最终含量用平均值表示。
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