2。2实验仪器和设备

仪器和设备：BIO-RAD小型垂直电泳槽、BIO-RAD Power Pac Basic电泳仪、分析天平奥毫斯AR224CN、离心机Eppendorf Centrifuge 5430、恒温金属浴 TU-10、台式振荡器TS-1、转膜机 Trans-Blot SD Cell（购于美国伯乐公司）、pH计PHS-3C、恒温磁力搅拌机HJ-3、漩涡混合器WH-866、恒温摇床TS-100B、电热恒温水浴锅 DK-S26、超声波清洗器KQ-500型、循环水式多用真空泵 SHB-III、X射线摄影暗匣 AX-II、Waters alliance 高相液相色谱仪、色谱柱 YMC-Pack Pro C18、溶剂过滤器

3实验方法

3。1样品的处理

3。1。1槲皮素提取物受试物的配置

槲皮素和根皮素受试液配制方法：溶剂为DMSO，母液终浓度为50 mM。

3。1。2蛋白质修饰反应模型的建立

大豆分离蛋白母液配制方法：将大豆分离蛋白配制成浓度为2 mg/mL的母液。

ACR（1 mM）溶液配制方法：通风橱下精准取4。15 μL ACR溶液溶于30 mL PBS溶液。

在EP（0。2 mL容量）管中按下表加试剂，做三组平行以验证实验数据真实性，然后将EP管置于37℃水浴锅中反应24小时，放-80℃备用。

表1样品试剂添加量文献综述

大豆分离蛋白（Control） 大豆分离蛋白ACR 大豆分离蛋白ACR

Que 

1 mM 大豆分离蛋白ACR

Que 

2 mM 大豆分离蛋白ACR

Phl

 1 mM 大豆分离蛋白ACR

Phl

 2 mM

大豆分离蛋白（μL） 95 95 95 95 95 95

ACR (μL) 95PBS 95 95 95 95 95

QUE/PE

 (μL) 0 0 Que 4 Que 8 Phl 4 Phl 8

DMSO（μL） 10 10 6 2 6 2

3。2 SDS-PAGE法检测蛋白质修饰程度

3。2。1制胶 

（1）组装胶架

（2）检漏：将电泳板安装好后加满水，等待5 min左右，观察是否漏水。

（3）制备分离胶：本次实验选择的是10%分离胶和3% 浓缩胶。制备10%分离胶约30 mL。