(3)样品的制备:将得到的粗制品用甲醇溶解定容,为测定液。
(4)样品的测定:移取测定液1 mL置于具塞试管内,再分别加5%香草醛一冰醋酸溶液0.2 mL和高氯酸0.8 mL,混匀、密塞,置60℃恒温水浴中显色15 min,取出后立即以冰水冷却5 min,各加入冰醋酸5.0 mL,摇匀,静置10 min,以试剂空白为参比,用uV一722型分光光度计于波长544 nm处测其吸光度。
2.2.5 新鲜紫山药制备及含水量测定
2.2.5.1 新鲜紫山药制备
(1)紫山药的洗涤:选取无腐烂,无霉变斑点的新鲜山药,用流动的水冲洗干净其外部的泥土、沙粒等。
(2)去皮切片:用刀去皮后,迅速切成2 3mm厚的薄片。
(3)用搅拌机将切好的薄片搅碎,成泥状,倒入数个培养皿中,放入冰箱备用。
2.2.5.2 含水量测定
用电子天平称量培养皿质量,倒入新鲜紫山药泥涂满平板,称重量;放入103℃的鼓风干燥箱中干燥水份,4小时候拿出第一次称重量,再放入干燥箱中干燥,半小时后第二次称重量,反复此操作,直至质量稳定不变。
2.2.6 紫山药皂甙的纯化
2.2.6.1 大孔树脂的预处理
D101大孔树脂用95%的乙醇浸泡24 h,除去杂质,用蒸馏水洗至无醇,再用5%的氢氧化钠浸泡3 h,用蒸馏水洗至pH中性后,用5%的盐酸浸泡3 h,再用蒸馏水洗至pH中性。
2.2.6.2 紫山药皂甙的纯化工艺
(1)紫山药皂甙粗提液的制备
分别称取3g紫山药干粉,料液比1:10,65%乙醇,置于80℃,回流1.5h。2.2.4的方法制备皂甙提取液。
(2)大孔树脂纯化工艺
分别称取5g预处理过的大孔树脂于100ml的锥形瓶中,加入20ml的提取物水溶液(紫山药皂甙含量3.58g/L),室温下摇床震荡3h,使其达到饱和吸附,吸取上层液测定紫山药皂甙吸光度。
将上述充分吸附过的紫山药皂甙水溶液进行过滤,除去水液,再将其置于锥形瓶中,分别加入30%、50%、70%、90%乙醇50ml,封口置于锥形瓶中放入摇床中振荡3h,使其洗脱平衡,吸取上层液测定紫山药皂甙的吸光值。
比较各不同质量分数乙醇所洗脱的吸光值,得到最佳纯化条件。
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