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    (2)每个样品管加入20mL正己烷,拧紧盖子,摇匀。放入摇床设置参数为温度25℃,转数为150r/min,振荡15min。然后将样品管放置于离心管架上静置10min。

    (3)对静置后的样品进行抽滤,抽滤完成后取滤纸上的滤渣于新的50mL离心管中。

    (4)用100mL量筒称量20mL超纯水,倒入样品管中,摇匀放在离心管架上。

    (5)将样品管连同离心管架放入超声波清洗器(功率220W,频率50KHZ)中,设置超声时间为15min。

    (6)每个样品管中用移液器加入卡瑞Ⅰ试剂500µL,卡瑞Ⅱ试剂500µL摇匀振荡(25℃ 150r/min)5min。

    (7)样品离心:离心条件为4℃,10000r/min,离心10min。对称的两个样品管的平衡时误差小于0.2g。离心后取中层液过0.22µm滤膜,HPLC检测样品中丙烯酰胺的含量。

    (8)HPLC色谱条件 色谱柱:XBridgeTM C18色谱柱,流动相为乙腈:水(10:90,v:v),流速为1.0mL/min;进样量为10µL;柱温为25℃;进样方式:自动进样;检测波长为210nm。

    2.2.3 丙烯酰胺标准溶液的配制与标准曲线绘制

    (1)精确称量丙烯酰胺标准品0.0500g,用超纯水(哇哈哈纯净水)定容至50mL棕色容量瓶中,配置成浓度为1000µg/mL的丙烯酰胺标准储备液

    (2)分别取1000µg/mL的标准使用液1.25、2.5、5、7.5、10、12.5mL,超纯水定容至25mL棕色容量瓶中,配置成浓度为50、100、200、300、400、500µg/mL的标准液,用0.22µm水系过滤膜过滤后,置于样品瓶中。然后按照规定的色谱条件进行HPLC检测,得到相应的丙烯酰胺的出峰时间以及峰面积,做出峰面积对丙烯酰胺浓度的标准曲线,求出回归方程y=0.1872x+0.3438,R2=0.9937,线性关系良好。HPLC的检出限为0.01µg/mL,有效范围为50-500µg/mL。

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