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    (1) 酶解单因素实验:以脂解率为判定标准,研究底物浓度、加酶量、酶解温度、pH及酶解时间对酶解效率的影响,通过测定酸价、皂化值的方法得到相应的产物的脂解率大小。
    (2)不同酶解率猪脂产物分析:选择不同脂解率的猪脂,对其分别进行脂肪酸含量分析及其中挥发性成分的GC-MS分析,得到不同脂解率的猪脂挥发性成分的差异,并对下一步研究进行美拉德反应的条件优化提供帮助。
     2 实验材料和方法
    2.1 实验材料
    2.1.1 原料与试剂
        精炼猪油,购自安徽牧羊油脂有限公司有限公司;无水乙醇、95%乙醇、无水乙醚、无水磷酸氢二钠、柠檬酸、冰乙酸、1,2-二氯苯、甘氨酸、氢氧化钠,分析纯;盐酸(36%-38%),分析纯;甲醇,色谱纯,以上购于国药集团化学试剂有限公司;缓冲溶液标准液;酚酞指示剂(0.1%);去离子水,实验室自制。
    表2-1 不同脂肪酶特性
    Table 2-1 The characteristics of the different kinds of lipase
    商品名    最适温度    最适pH    酶活    酶量    来源
    一鸣脂肪酶    40~50℃    7-8    20000U/g    1%~5%    
    江苏 泰兴一鸣生
    物制品有限公司

    诺文信脂肪酶
    Palatase 20000 L    40~60℃    7-8    20000U/g    1%~3%    无锡丹麦诺文信酶制剂公司

    2.1.2 仪器与设备
    表2-2 主要设备
    Table 2-2 Main equipments
    设备名称    型号    生产厂家
    数显恒温水浴锅    HH-4    上海森地科学仪器有限公司
    超级恒温水浴锅    601    上海森地科学仪器有限公司
    电子天平(0.001g)    JA2003    上海恒平科学仪器有限公司
    多头磁力加热搅拌器    HJ-4    常州国华电器有限公司
    磁力搅拌器    78-1B    上海森地科学仪器有限公司
    pH 计    DELTA320    梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司
    数显鼓风干燥箱    GZX-9140 MBE    上海博迅实业有限公司医疗设备厂
    萃取头    75 μm CAR/PDMS    美国Supelco公司
    GC-MS气相色谱质谱联用仪    6890-5973    美国安捷伦公司
    小型仪器以及玻璃仪器:酸式滴定管(25mL,23℃)、碱式滴定管(25mL,20℃)、球形冷凝管、圆底烧瓶、陶瓷助沸圈、烧杯(50mL—500mL不等)、锥形瓶、铁架台、容量瓶(25mL—1000mL不等)、玻璃棒、称量纸、量筒;手套、一次性滴管;一次性杯子、铁勺、镊子,保鲜膜、菱形磁力转子(30mm),温度计、pH试纸,10mL顶空瓶。
    2.2 实验方法
    2.2.1 猪脂酶解工艺
    称取适量猪脂置于酶反应器中,由超级恒温水浴锅加热,待温度达到预设温度后,加入一定量的磷酸氢二钠及柠檬酸缓冲液调节反应体系pH,添加一定量的脂肪酶及磁力转子,开启磁力搅拌器,密封反应一定时间后于90℃下灭酶10min。取出反应液冷却至30℃左右,4500rpm离心25min后可得到酶解产物。
    2.2.2 酸价(A.V.)的测定
    酸价是衡量脂肪游离酸多少的一个指标,参照现行适用的GB/T 5530-2005标准,酸价是指中和1克油脂中游离脂肪酸所需氢氧化钾毫克数,用毫克每克表示。此次实验采用的是其中提及的冷溶剂法,以氢氧化钠作为为滴定标准物[25]。方法如下:量取50ml乙醚和95%乙醇1:1混合液于锥形瓶中,加入2-3滴酚酞溶液,用0.5%氢氧化钠乙醇溶液中和后,称取1g酶解过得猪脂,摇动锥形瓶至样品溶解,继续用氢氧化钠乙醇溶液边摇动边滴定,直至出现微红色并保持15s不退色,由式2-1计算酸价。并且同时做平行实验并记录数据。
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