白芍，为毛茛科芍药属(也常被分立为芍药科)植物芍药（Paeonia lactiflora Pall.）的干燥根。主产浙江、安徽、四川等地。浙江产者，称为杭白芍，品质最佳。李仲兴等（2000）研究表明白芍水煎液对表皮葡萄球菌和金黄色葡萄球菌有一定的抑菌效果[1]。杜锐等（2006）研究发现白芍生物碱对金黄色葡萄球菌的抑制作用明显[2]。刘润德等（2010）采用滤纸片法测定了白芍对煎液大肠杆菌的抑制效果，结果表明白芍煎液对大肠杆菌有一定的抑制效果[3]。在这些研究当中可以得出杭白芍提取物具有抑菌效果，有充分的研究价值，所以我们利用杭白芍为材料，进行了接下来的实验。

    这次采用加热回流法对杭白芍粗提取，用固体培养基连续稀释法评价杭白芍提取物的抑菌性能。

1 材料与方法

1.1 实验材料、试剂与仪器

1.1.1 药材

杭白芍 （Paeonia lactiflora Pall.）

1.1.2 菌种

菌株名称 拉丁文名称

大肠杆菌 Escherichia coli

变形杆菌 Proteusbacillus vulgaris

枯草芽孢杆菌 Bacillus subtilis

产气肠杆菌 Enterobacter aerogenes

金黄色葡萄球菌 Staphylococcus aureus

腐生葡萄球菌 Staphylococcus saprophyticus    

藤黄微球菌 Micrococcus luteus

溶酪大球菌 Macrococcus caseolyticus

白色念珠菌 Monilia albican

荧光假单胞菌 Pseudomonas fluorescens

1.1.3 试剂

95%乙醇，DMSO，卡那霉素， 蔗糖，琼脂，牛肉膏，蛋白胨，氯化钠，丙三醇，石油醚，乙酸乙酯，正丁醇

1.1.4 仪器

电子天平，电热恒温鼓风干燥箱，手提式高速万能粉碎机，数显恒温水浴锅，循环水多用真空泵，旋转蒸发仪，超声波清洗器，高压蒸汽灭菌锅，冰箱，电子万用炉，洁净工作台，恒温细菌培养箱，恒温培养摇床，医用低温保存箱，恒温磁力搅拌器，漩涡振荡器，微量移液器文献综述

1.2 实验方法

1.2.1 杭白芍提取

杭白芍前处理：将购买的杭白芍放入 55℃烘箱烘干至恒重，用粉碎机粉碎，过60目筛子，置于干燥器保存备用。

杭白芍的提取：称取粉碎好的干燥的杭白芍粉末 200 g，加 75% 乙醇 2000 mL（即料液比1 : 10），浸泡过夜，90℃ 水浴回流提取 4 h，抽滤。药渣继续加入 75% 乙醇，按以上条件提取三次。合并滤液，50℃ 左右旋蒸掉乙醇溶剂，用蒸馏水定容至 200 mL（加少量 DMSO 助溶，DMSO 终浓度控制为5%），使得杭白芍乙醇提取物水溶液中的生药量为 1 g/mL。配好的药液经过 0.22 μm 无菌滤膜过滤除菌，4℃ 冰箱保存备用。

1.2.2 卡那霉素溶液的配制

准确称取 2.5 g卡那霉素置于洁净的小烧杯中；加入 40 mL 无菌水，充分混合溶解之后定容至 50 mL （浓度为 50 mg/mL）；0.22 μm 无菌滤膜过滤除菌，小份分装（1 mL 每管）后，置于-20℃ 冰箱保存备用。