2.2.2菊粉提取后的分离纯化
除杂
经热水浸提的菊芋提取液中,还含有一些果胶、蛋白质及色素等杂质,它们既影响菊糖品质,又增加过滤负担。因此,需要对菊芋提取液进行澄清处理。原则是既保证除杂彻底,又尽量使菊糖损失率降到最低,并减少新杂质的引入。
(1)盐析沉淀法
取提取液适量,调PH至5,加入(NH4)2SO4溶液及絮凝剂聚丙烯酞胺,以沉淀胶体、蛋白质等,再经减压过滤将杂质除去。此法除杂不彻底、滤速较慢。
(2)加灰充碳法
向提取液中加石灰乳调至PH至13.5,再通入CO2调至7.2,以沉淀非糖分胶体杂质,最后经减压过滤除去沉淀。*(13)
(3)酶解法
在50°C PH为6.5的条件下,向提取液中加入蛋白酶充分反应于40℃下调PH为4.5 ,再加入果胶酶充分反应,然后再加3mol/LCaCl2,调PH至13,除去钙盐沉淀,最后加磷酸调PH至6.5一7.0,除去磷酸钙等杂质,效果良好。但蛋白酶与果胶酶价格较高,操作繁杂不易控制,故在实际应用中有一定局限性。*(14)
(4)磷酸钙沉淀法
首先向提取液中加入Ca(OH)2充分吸附澄清,再加入H3PO4与其中过量的Ca(OH)2反应,产生的CaPO3进一步吸附澄清*(15)。采用这种固液界面吸附法对菊芋提取液进行除杂,效果较好。吴洪特采用熟石灰一磷酸澄清除杂,调PH为13,温度80℃,保温15min,总糖和菊糖损失量较小,除杂较彻底。
脱色
菊芋提取液除杂后,颜色仍较深,呈棕黄色,需进行脱色。目前,较为成熟的脱色方法主要有活性炭吸附法、H2O2氧化法、AlCl3脱色法和树脂法。*(16)
活性炭吸附法脱色
菊芋提取液中的有色物质多而且复杂,一部分是菊芋本身所含的,另一部分是由菊芋中原本的一些物质,经过慢慢的化学反应而形成的。既影响菊芋多糖的颜色又影响其纯度,必须设法除去。由于这些色素中含有不饱和键的基团如—HC=CH—、—N=N—、—CH=N—等,可以用活性炭法吸附溶液中带电的色素分子将其除去[40]。 活性炭无臭、无、无毒的黑色细微粉末,同时脱色、脱臭效果良好,而且可以反复使用,成本低,非常适合工业化生产。活性炭对多糖提取液的脱色效果很好,目前,很多国内外糖厂使用活性炭进行脱色。*(17)
H2O2氧化脱色
该法在酸或碱性条件下进行,故目标物需在此条件下稳定存在,且不易被氧化。而菊糖遇酸易降解,容易造成损失。胡蝶等研究了H2O2对菊糖提取液脱色的条件为脱色温度80℃,时间,H2O2用量为3%,PH为8.5。
AlCl3脱色
采用AlCl3对提取液进行脱色处理,其透光率与AlCl3用量呈正相关,而总糖回收率却呈下降趋势。熊善柏等采用0.53g/dL的AlCl3于100℃处理3min,所得提取液色浅澄清、透明度高,透光率和总糖收率分别为95%和91.8%。
树脂脱色
①大孔吸附树脂法
大孔吸附树脂是一类具有三文网状结构、高度交联的新型高分子分离材料,常温下十分稳定,不溶于有机溶剂。它通过与被吸附分子间的范德华力,借助巨大的比表面积进行物理吸附。具有吸附选择性较高、脱色体积大、安全污染小、易再生等优点。
②离子交换树脂法
离子交换树脂是一类具有特殊功能的高分子合成材料。现已被欧美国家广泛用于多糖脱色,主要依靠吸附作用和对带电色素分子的交换作用来实现。一方面树脂与色素之间的阴离子可以离子键形式相互交换另一方面,色素的非极性部分通过疏水力与树脂基团结合。糖液`,的色素多带负电荷,故可利用阴离子交换树脂除去色素。在菊糖损失较少的前提下,选择特异性强的离二交换树脂进行脱色处理,可为纯化菊糖创造更有利地条件。*(18)
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