苦参总碱和淫羊藿总黄酮对人脐带静脉内皮细胞增殖的影响(2)

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我国中医药治疗与血管生成相关病症的研究相结合已有相当长的研究历史。一些中药及其活性成分对肿瘤血管生成表现出良好的抑制作用[3-5]。

苦参总碱的抗肿瘤作用日益受到关注。已有研究证实其苦参碱可以通过抑制肿瘤细胞的增殖、诱导细胞分化凋亡、抑制肿瘤细胞黏附或浸润转移、抑制端粒酶活性、抑制细胞周期正调节因子的表达、改变细胞核酸的分子序列等方式达到抗肿瘤的药用效果[6-10]。

淫羊藿(Herb Epimedii)又名仙灵脾、三枝九叶草、羊合叶等，系小蘖科淫羊藿属植物-优尔|文\论/文'网www.youerw.com。其辛、甘，性温，归肝、肾经[11]。药用历史悠久，疗效确切，是临床常用中药。研究表明淫羊藿的有效药理成分——淫羊藿总黄酮可以起到抑制肿瘤细胞的增殖、促进肿瘤细胞凋亡、减弱肿瘤细胞的转移侵袭能力、抑制肿瘤细胞端粒酶活性、清除自由基等抗肿瘤的作用[12-17]。但目前对于淫羊藿总黄酮抗肿瘤的机制的研究还需进一步深入。

本课题以人脐静脉内皮细胞（HUVEC)为模型，提取苦参总碱和淫羊藿总黄酮，观察苦参总碱和淫羊藿总黄酮对HUVEC细胞增殖的影响。

2材料与方法

2.1实验材料

苦参（中药市场（批号：20060715））；淫羊藿（绵阳安康大药房（经成都中医药大学马家骅博士鉴定为小檗科淫羊藿属植物））。

2.2实验试剂

溴甲酚绿（成都市科龙化工试剂厂）；氧化苦参碱对照品（中国药品生物制品检定所）；芦丁标准品（中国药品生物制品检定所）；胎牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公司）；高糖DMEM培养液（Gibco）；0.25%胰酶（Gibco）；二甲基亚砜( DMSO)（Sigma）； Eukitt胶（Sigma）；MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒（凯基生物材料有限公司）；其余试剂均为国产分析纯。

2.3实验仪器

AUY220电子分析天平（SHIMADZU CORPATION JAPAN）；超级洁净工作台（博讯实业有限公司医疗设备厂）；T1-SM120型倒置显微镜（Nikon）；RE52-05型旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；高压灭菌器（Zealway）；752型紫外可见分光光度计（上海菁华科技仪器有限公司）。

2.4实验方法

2.4.1苦参总碱的提取与定量

2.4.1.1提取

参考文献[18] ，采用水煎煮法提取苦参总碱。精确称取粉碎的苦参粉100g，加纯化水煎煮提取3次，3次加水量分别为1000ml、800ml、600ml，煎煮时间分别为：1.5h、1h、0.5h。将提取液合并、经过过滤、浓缩、烘干干燥得到苦参总碱粉末。

2.4.1.2定量

采用溴甲酚绿比色法[19]进行苦参总碱的含量测定。以氧化苦参碱标准品的浓度为横坐标，以氧化苦参碱与溴甲酚绿反应后的溶液在420nm处的吸收度为纵坐标作标准曲线。将提取的苦参总碱样品配制成溶液与溴甲酚绿反应后同样在420nm处测吸收度，所得的数据代入标准曲线，计算得样品中的苦参总碱含量（以氧化苦参碱计）。