昆仑雪菊生物活性物质的提取与评价(3)
（7） 双水相萃取分离法
双水相萃取技术（ATPE）分离原理是物质在双水相体系中的选择性分配。该法设备投资少，操作简单，无有机溶剂残留污染。由于天然植物中所含的化合物众多，而双水相萃取技术具有较高的选择性和专一性，因此利用这些技术有希望为从天然植物中提取有效药用成分开辟一条新的思路。
（8） 超声波提取法
超声波提取是利用超声波空化作用加速植物有效成分浸出的提取。该法具有设备简单、操作方便、提取时间短、产率高、无需加热，有利于保护热不稳定成分、省时、节能、提取率高等优点。
1.3 黄酮化合物分析方法的研究现状
（1） 紫外分光光度法
黄酮类化合物其母核所含的游离羟基，在适当的介质条件下能与金属铝离子形成稳定的络合物而显黄色，所以可以用于定量测定。通常以芦丁为标准品，配制标准溶液，进行显色反应后确定溶液的最佳吸收波长，然后配制一系列不同浓度的溶液，绘制标准曲线，计算得到回归方程。最后测定样品溶液的吸光度，从而进一步计算得到样品的总黄酮含量。各种果实和叶子当中的黄酮均可利用紫外分光光度法来测定。例如，柑桔皮[7]、沙枣叶[8]、石榴皮[9]、海红果[10]、罗布麻叶[11]、芒果叶[12]、红枣[13]等中的黄酮测定。
（2） 高效液相色谱法
高效液相色谱法(HPLC法)是一种稳定的、准确的测定方法，能测定样品中黄酮的各种主要成分的含量。在HPLC法当中，主要有两种测定方法。一种是未经水解，以芦丁为标准品，以芦丁和槲皮素来定性黄酮色谱峰[14]，或辅以二极管阵列检测器定性色谱峰来测定总黄酮的含量；一种是经水解，测定黄酮水解后的主要苷元来测算总黄酮含量，或综合考虑游离苷元与总苷元的含量来推算总黄酮的含量。
（3） 荧光光度法
如果物质成分复杂，对吸光值产生干扰，影响试验结果的准确性[15]。因此，为了寻求操作简便、成本低、更加准确的检测方法，可根据黄酮类化合物能与铝离子形成稳定的荧光络合物，采用荧光光度法测定总黄酮的含量。
1.4 菊花的研究现状
1.4.1 菊花的化学成分
目前，已从菊花中分离鉴定出20余类、300多种天然成分，其中包括30多种黄酮类物质，30多种人体必需的矿物元素，20多种氨基酸，数十种芳香族化合物，还有丰富的有机酸、萜烯类、文生素、木脂体、酶类、多糖等具有生物活性的天然成分。 现代药理研究表明，菊花中的挥发油、总皂苷、氨基酸、黄酮类物质，可抵抗病原体，增强毛细血管抵抗力，其中，总黄酮含量达到12%，远远超过了其他各种菊类。菊花中富含的这些生物总黄酮、萜类物质、含硫化合物，被统称为具免疫调节功能的因子，是降血压、降血脂、调节血糖、抗肿瘤与抗衰老相关药物中重要的元素。
1.4.2 菊花的功效
野菊花水提物及水蒸气蒸馏法提取的蓝绿色挥发油对多种致病菌、病毒有杀灭或抑制活性，水提取物对金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌、大肠埃希菌、伤寒杆菌等的抑制活性强于挥发油。野菊花含菊醇、野菊花内酯、氨基酸、微量元素等多种活性成分。其水提取液对心血管系统有明显保护作用，能提高心输出量，增加心肌供氧量。
抗炎作用：付为琳，孙桂菊[16] 给小鼠腹腔注射菊花提取物，可减小皮内注射组织胺局部苔盼兰的扩散，显示其能抑制毛细血管通透性，而起到抗炎作用。
抗病毒作用：国外研究发现[17]，菊花对单纯疱疹病毒(HSV—1)、骨髓灰质炎病毒和麻疹病毒具有不同程度的抑制作用，高浓度时对流感病毒(PR8株)也有抑制作用。另外，菊花具有抗艾滋病作用，能抑制逆转录酶和HLV复制的活性，从其分离得到的金合欢素—7一O—B—D吡喃半乳糖苷是抗HIV的新活性成分，且毒性相当低。