Trolox(ALDRICH(±)-6-Hydoxy-2,5,7,8-tetramethyl-chromane-2-carboxyiicacid);山萘酚(Kaempferol,上海源叶生物科技有限公司);2,4,6-三吡啶基三嗪(Sigma-Aldrich,,美国);邻苯三酚(Kermel,又名焦性没食子粉,美国);Tris(Solarbio,又名三甲醇氨基甲烷或缓血酸铵,美国);DPPH(又名二苯代苦味酰基自由基,美国);36%盐酸、三氯化铁、邻二氮菲(又名1,10-菲啰啉)、硫酸亚铁、醋酸钠、冰醋酸、绿矾(七水硫酸亚铁)和无水乙醇等其他试剂均为国产分析纯;5ml离心管;点样板(MicroAmp,货号:4346906)

酶标仪(Thermo,TecanAustriaGmbH公司);移液枪(单道可调移液枪,德国);纯水机(实验室级超纯水机,南京易普达科技发展有限公司);电子天平(上海越平科学仪器有限公司);电热恒温振荡水槽(上海福玛实验设备有限公司)

2。2实验方法

2。2。1总抗氧化能力测定(FRAP法)文献综述

测定原理:FRAP法测定总抗氧化能力的原理是酸性条件下抗氧化物可以还原Fe3+-TPTZ产生蓝紫色的Fe2+-TPTZ,随后在593nm测定吸光度,即可作为样品中的总抗氧化能力的指标。由于反应在酸性条件下进行,可以抑制内源性的一些干扰因素。并且由于样品中的铁离子或亚铁离子的总浓度通常低于10μM,因此样品中的铁离子或亚铁离子不会显著干扰FRAP法的检测反应。

试剂制备:FRAP工作液的配制(1:1:10)①10mmol/L的TPTZ(2,4,6一三吡啶基三嗪)称取0。031234g的TPTZ,并用移液枪吸取36%的HCl0。1mL加入到29。9mL的dH2O中(“酸入水”),先用1~2mL的被稀释的盐酸溶解TPTZ,再用10mL规格的容量瓶定容(定容液为稀释后的的盐酸)备用;②20mmol/L的FeCl3(三氯化铁)称取0。0324g的FeCl3,加入到烧杯中,先用1~2mL的dH2O溶解,再用10mL规格的容量瓶定容(定容液为dH2O)备用;③0。3mol/L的醋酸钠缓冲液称取1。02g的醋酸钠,溶解于4mL的冰醋酸中,再用50mL的容量瓶定容(定容液为dH2O)备用。

具体步骤:将①:②:③=1:1:10比例混合,按情况核定工作液的体积,依据20μL样品液+150μL工作液于37℃的酶标仪中静置8min,于593nm波长处测吸光值。

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