柑橘悬浮细胞 R10  1% Serva  2%

（摘自夏海武，陈庆榆。植物生物技术。合肥工业大学出版社，2008:97-118）

果胶酶的主要作用是软化细胞壁，降解中胶层，释放单细胞，在一些难分解的植物原生质体的分离中有所使用。为了进一步了解果胶酶对于去除细胞和细胞之间联系成分的效果，该实验选用了拟南芥和杂交马褂木的叶片作为实验材料，比较了果胶酶对这两种结构组成差异很大的叶片分离的效果，为果胶酶在原生质体分离中的广泛应用提供一定理论基础。

2 材料及仪器

2。1 实验材料

试验材料为杂交马褂木的实生苗和拟南芥植株叶片。

2。2 仪器与试剂文献综述

仪器：烧杯、量筒、玻璃棒、手术刀片、三角瓶、移液枪、人工培养箱、离心管、离心机、光学显微镜、荧光显微镜、血球计数板

试剂：纤维素（cellulose）R-10、离析酶（macerozyme）R-10、果胶酶（Pectolyase）Y-23、甘露醇(Sigma)、2-（N-吗啡啉）乙磺酸(MES ,Sigma）（pH5。7）、FDA、KCI、CaCl2、NaCl 、葡萄糖、MgCl2 、丙酮、无菌水

酶解液：取6只三角瓶编号为酶解液0、酶解液1、酶解液2、酶解液3、酶解液4、酶解液5，在其各加入1。5%纤维素酶R-10和0。05%离析酶R-10于5ml 0。8M甘露醇、2。5ml 80mM KCI、1ml 200mM MES（pH5。7），在酶解液2、酶解液3、酶解液4、酶解液5中分别加入0。05%、0。1%、0。2%、0。4%果胶酶Y-23，搅匀溶解，用蒸馏水定容到10ml,静置一夜。冷却至室温后，再各加入0。1ml 1M CaCl2，此为配好的酶解液，置于冰箱中备用。

W5溶液：154mM NaCl +125mM CaCl2 + 5mM KCI+2mM MES（pH5。7）+5mM葡萄糖。

MMg溶液：4mM MES（pH5。7）+0。4 M甘露醇+15mM MgCl2 。