试剂

实验组 Tris-HCl缓冲液

dH2O

槲皮素 邻苯三酚溶液

10mmol/L的HCl

A1 2。25mL 0。5mL --- 0。2mL ---

A2 2。25mL 0。5mL --- --- 0。2mL

A3 2。25mL --- 0。5mL 0。2mL ---

A4 2。25mL --- 0。5mL --- 0。2mL

表1邻苯三酚自氧化体系

2。2。4 羟基自由基（·OH）体系 

测定原理：Fe2 + 与邻二氮菲能够生成稳定的橙红色络合物在536nm 波长有最大吸收峰。采用 Fe2+/ H2O2体系，通过 Fenton 反应产生·OH自由基，自由基将一部分 Fe2+ 氧化为 Fe3+，使橙红色络合物减少，在 536nm 处的最大吸收峰会消失，吸光度值则明显降低。当在反应体系中有自由基清除剂存在时，上述过程受到抑制，通过吸光度的变化，可衡量出抗氧化剂抗氧化能力的高低。

配制试剂：①0。75mmol/L 的邻二氮菲：称取0。0037g 邻二氮菲溶于25mL的dH2O中，备用；②0。2mmol/L pH7。4磷酸盐缓冲液：称取0。0093024g 磷酸二氢钠、0。01739g 磷酸氢二钠溶于50mL的dH2O，备用；③0。75mmol/L的FeSO4·7H2O：称取0。0052g FeSO4·7H2O溶于25mL的dH2O中，备用；④0。1％的H2O2：用移液枪吸取0。1mL的30％ H2O2，用dH2O定容至30mL，备用；

具体步骤：取多个5ml离心管，按表2的顺序加入试剂；在37℃水浴锅中准确反应1h；体系反应后，用移液枪取200μL最终反应液于点样板中，快速在536nm处测定吸光值，每一吸光度平行测定3次，取平均值；同浓度芦丁作阳性对照 ,每个处理均做三个重复。按公式2计算自由基清除率，并用EXCEL、SPSS等处理数据。

羟基自由基清除率（%）[14,15]= 二价铁离子的减少量/原本将要生成的二价铁总离子总量 ×100%= [(A2-A1)/(A0-A1)]×100%                    （公式2）

（注：A2、A1、A0分别为加入加样品、不加样品、不加样品和 H2O2体系的吸光度值）

    试剂

实验组 邻二氮菲 PBS缓冲液 dH2O 槲皮素 FeSO4·7H2O 0。1%H2O2 dH2O

A0 0。5mL 1mL 0。5mL ---- 0。5mL ---- 0。5mL

A1 0。5mL 1mL 0。5mL ---- 0。5mL 0。5mL ----

A2 0。5mL