表2羟基自由基清除体系

2。2。5 DPPH·自由基体系 文献综述

测定原理：DPPH即1,1-二苯基-2-苦肼基自由基，由于分子中存在多个吸电子的-NO2和苯环的大π键，所以氮自由基能稳定存在。DPPH·自由基在乙醇溶液的最大吸收波长为517nm，加入抗氧化剂后，其与DPPH自由基的单电子配对使最大吸收波长处的吸收减弱，因而可通过吸光值的变化来评价抗氧化剂清除自由基的能力。

配制试剂： ①2。5mg/LDPPH·乙醇溶液（2。5mg=0。0025g），即0。0025g DPPH溶于1L的无水乙醇中；②用电子天平称取2。5mg槲皮素定容于50ml容量瓶中，配制成0。05mg/ml的浓溶液，再稀释成0。01,0。02,0。03,0。04mg/ml的槲皮素稀溶液。

具体步骤：取多个5ml离心管，按表4的加样顺序从左往右加入试剂，摇匀；摇匀后避光放置30min；用乙醇调零；用移液枪取200μL最终反应液于点样板中，用酶标仪于517nm处测吸光值，每一吸光度平行测定3次，取平均值；同浓度芦丁作阳性对照 ,且每个处理均做三个重复。按公式3计算自由基清除率,并用EXCEL、SPSS等处理数据。

DPPH·清除率（%）[14] =[ 1-（A1-A2）/A0]×100% （即总DPPH自由基减去剩余自由基量）                                              （公式3）

（注: A0为未加样品液的DPPH ·溶液的吸光度; A1为所测样品液的吸光度; A2为相应质量浓度样品液的本底吸光值）