SybrGreen qPCR Master Mix 2X 10

引物F (10uM) 10µM 0。4

引物R (10uM) 10µM 0。4

ddH20 7。2

Template (cDNA) 2

Total                                                                         20µl         

（２）PCR循环条件

Thermal Cycler Times and Temperatures 熔解曲线步骤

Initial Steps Each of 45 cycles

Melt Anneal Extend

LightCycler480 Software Setup(Roche 罗氏) HOLD CYCLE

3 min 95℃ 7 sec 95℃ 10s  57℃ 15s  72℃

2。5数据分析文献综述

不同处理间的显著性差异运用t测验来检测，利用SigmaPlot 10。0绘图。

3  研究结果

3。1总RNA的提取与反转录

利用Trizol提取试剂盒提取24个样品总RNA，用DNase I处理去除样品中的基因组DNA污染，RNA质量经琼脂糖凝胶电泳检测后结果见图1。利用紫外分光光度计检测样品OD值（表1）。结果表明，样品浓度在176。54-703。26 ng/ul之间，OD260/OD280比值在1。92-2。05的范围内，说明获得的总RNA纯度较好。800ng总RNA参照第一链cDNA合成试剂盒的方法进行反转录。