胡萝卜瓣化型细胞质雄性不育atp6基因的分离和功能分析(4)
实验所用的试剂盒能够从各种类型的琼脂糖凝胶之中回收最多达到8微克DNA，回收的比例为60-85%。可纯化获得纯度非常高的DNA，而且可以使其片段完整并具有很高的生物活性，该片段可以直接用于许多分子生物学实验，例如：PCR扩增、测序和体外转录等。
Buffer DE-A：是凝胶的熔化剂，含有DNA保护剂，以防高温条件下DNA的降解，室温条件下密封储藏。
Buffer DE-B：是结合液，能够促进70bp以上DNA片段选择性的结合于DNA制备膜之上，室温条件下密封储藏。
Buffer W1：是洗涤液，室温密闭贮存。
Buffer W2 concentrate：是去盐液，试剂瓶上有指定体积的说明，按照说明加入无水乙醇，充分混匀，室温条件下密封储藏。
Eluent：洗脱液，室温密闭贮存。
1.4.2目的片段的回收和克隆实验步骤
使用 DNA 凝胶回收试剂盒 (AXYGEN)对扩增后特异性的片段进行回收操作，具体如下：先将无水乙醇（试剂瓶上指定的体积）加入到Buffer W2 concentrate中；提前准备好没有核酸污染并且没有核酸酶污染的离心管和Tip头；准备好75摄氏度水浴；检查Buffer DE-B有没有不溶性沉淀产生，如果有沉淀，则在70摄氏度水浴加热直至沉淀消失，然后将其冷却达到室内温度以后再进行实验。把含有目的DNA的琼脂糖凝胶在紫外灯照射下切去，用吸水纸充分吸收凝胶表面上的液体然后将其切碎，算出凝胶的质量，这个质量当作一个凝胶体积；加入三个凝胶体积的Buffer DE-A，充分混匀后在75摄氏度环境中加热，间断混合，直至凝胶块完全熔化；加入0.5个Buffer DE-B，混合均匀，直到DNA片段不到400bp的时候，然后加入一个凝胶体积的异丙醇；吸取上一步所得的混合溶液，在DNA制备管之中加入此混合溶液，离心操作1分钟，12000*g，而后舍弃过滤溶液；把制备管置回离心管，加入500微升Buffer W1，离心操作30秒，12000*g，而后舍弃过滤溶液；把制备管置回离心管，加入700微升Buffer W2，离心操作30秒，12000*g，而后舍弃过滤溶液；再次使用上述实验方法，然后用700微升Buffer W2清洗一次12000*g离心操作1分钟；将制备管置回离心管，离心操作1分钟，12000*g；将制备管置于干净的1.5毫升规格的离心管之中，加25到30微升Eluent或去离子水于制备膜的中心部位，将其放置1分钟，温度为室温，最后12000*g离心操作1分钟洗脱DNA。