基于SSR的不同群体鳜遗传多样性初步研究(3)
（4）加入200μL无 水乙 醇，充分颠倒混匀，再简短离心，去除管壁内侧的水珠。
注意：在加入无 水乙 醇后，溶液可能会出现絮状沉 淀，但并不影响实验。
（5）将溶液以及可能出现的絮状沉淀一起转移入放入收集管中的吸附柱CB3中，12000 rpm离心30 s，弃滤液，再将吸附柱CB3放回收集管中。
（6）加入500μL缓冲液GD（使用前先按照说明要求加入无水乙醇），12000 rpm离心30 s，弃滤液，再将吸附柱CB3放回收集管中。
（7）加入600 μL漂洗液PW（使用前先按照说明要求加入无水乙醇），12000 rpm离心30 s，弃滤液，再将吸附柱CB3放回收集管中。
注意：漂洗液PW应沿着吸附柱管壁加入，有助于冲洗沾在管壁上的成分。
（8）重复操作步骤7。
（9）12000 rpm离心2min，弃滤液。将吸附柱CB3在室温下静置5 min，晾干残留的漂洗液。
注意：漂 洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶 切、PCR等）实验。
（10）将吸附柱CB3转移入干净的离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加30μL洗脱液TE，室温下静置5 min，12000 rpm离心2min。
（11）再次悬空滴加20 μL洗脱液TE，室温下静置5 min，12000 rpm离心2 min，最后将溶液转移。
注意：洗脱液TE的体积至少要50μL，体积过小过大均会影响回收效率。洗脱前，可先将洗脱液TE放入56℃烘箱预热，以提高DNA的回收效率。DNA产物应保存在-20℃的冰箱里备用，防止DNA降解。
（12）制作浓度为1%的琼脂糖凝胶，进行电泳（U=150V，电泳时间约为30 min），用成像仪进行拍照并查看结果。
实验中应注意如下事项：
（1）实验试剂如Proteinase K，应避免反复冻融，否则会造成提取效果不好、提取的量下降；
（2）如果缓冲液GA或GB中出现沉淀，可先放入37℃的烘箱中使其重新溶解，将其摇匀后再使用；
（3）离心使用的都是台式离心机，并且都是在室温下进行的。