利用VIGS方法分析TaJRL29的抗赤霉病功能
毕业论文关键词：小麦；望水白；赤霉病；病毒诱导的基因沉默
Analysis of the Relationship between TaJRL29 and its Resistance to Fusarium Head Blight via VIGS
Abstract：Fusarium head blight (FHB) is a fungal disease caused by Fusarium graminearum which severely affects the yield and quality of the wheat in the middle and lower reaches of Changjiang River in China. At present, the major wheat varieties with stable FHB resistance that are used in production are wheat cultivar Wangshuibai (WSB) and Sumai3 and their deviced lines. TaJRL29 is the member of the plant lectin protein family, which plays a significant role in defense signaling in plants. In this study, Barley stripe mosaic virus (BSMV)-based virus-inducing gene silencing method was used to induce slice of TaJRL29 in the wheat cultivar WSB. As a result, the TaJRL29-silenced WSB plants were more susceptible to F. graminearum infection with fungal symptom. Therefore, it could suggest that TaJRL29 is the important candidate genes in wheat to defense response to F. graminearum infection.
Key words: Wheat; Wangshuibai; Fusarium head blight; Barley stripe mosic virus (BSMV); Virus-Induced Gene Silencing (VIGS)
目 录
摘要 2
关键词 2
Abstract 2
Key words 2
引言 2
1 材料与方法 3
1．1 试验材料 3
1．1．1 植物材料 4
1．1．2 溶液及培养基的配制 4
1．2 试验方法 4
1．2．1 RNA的提取与反转录 4
1．2．2 植物基因组DNA的提取 4
1．2．3 大肠杆菌DH5α感受态的制备 5
1．2．4 热激法转化大肠杆菌感受态 5
1．2．5 普通少量质粒的提取 5
1．2．6 高浓度大量质粒的提取 5
1．2．7 目的基因片段的获取 5
1．2．8 PCR产物的纯化 5
1．2．9 载体的构建 6
1．2．10 载体的线性化 6
1．2．11 线性化模板的纯化 6
1．2．12 体外转录及涂抹 7
1．2．13 病毒涂抹 7
1．3 BSMV处理植株的病原菌接种与调查 7
2 结果与分析 7
2．1 BSMV重组载体的构建与体外转录 7
2．2 TaJRL29沉默后对望水白赤霉病抗性的影响 8
3 讨论 8
致谢 10
参考文献 11
利用VIGS方法分析TaJRL29与小麦赤霉病抗性关系
小麦(Triticum aestivum)是世界上最重要的粮食作物之一，但在小麦的整个生育时期，各种病害严重威胁着小麦的产量与品质。在众多的小麦病害中，70-80%由真菌引起，不仅直接造成作物产量与品质下降，而且其次生代谢产物也严重威胁着人畜的安全[1]。小麦赤霉病(Fusarium head blight，FHB)是世界温暖潮湿和半潮湿地区发生的一种毁灭性病害，在我国长江中下游、华南冬麦区和东北春麦区尤为严重，黄河流域及其他地区也偶有发生。但近年来，其发病面积不断扩大，病情趋于严重。小麦赤霉病主要是由禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)引起的小麦真菌病害，在小麦的各生育时期都能发生，造成苗枯、茎基腐烂和穗枯，甚至引起苗腐、茎基腐和穗腐，在我国尤其以穗腐的危害最为严重。小麦赤霉病不仅造成严重的减产和品质降低，感染赤霉菌的小麦籽粒中还会积累大量以单端孢霉烯族毒素（trichothecene）为主的毒素，对人畜有很大的危害[2]，如产生的脱氧雪腐镰刀菌烯醇（deoxynivalenol，DON）和玉米赤霉烯酮（zearalenone，ZEA）能引起发热、呕吐、腹泻等中毒现象，还具有致癌、致畸和诱变等作用，严重的甚至导致死亡。因此，挖掘赤霉病抗性基因，并深入研究其抗病作用分子机制，对小麦抗赤霉病育种尤为重要。