致  谢 10

TaRboh基因对拟南芥在铅胁迫的响应    引言

近年来，随着工农业的迅速发展，重金属污染已经成为一个日益严重的环境问题[1]。由于工、矿企业排放的污水灌溉农田，加上废弃物处理、开矿、城市交通、磷肥施用等人类活动和诸如大气沉降等均会造成土壤铅污染[2]。土壤被重金属铅污染后会影响农作物质量-优尔;文'论[文]网www.youerw.com，进而危害人类健康。我国受铅污染的土地面积很大，损失严重。拟南芥作为模式植物，有生长周期短、白花授粉、全基因组序列已公布的特点[3]。

拟南芥是双子叶模式植物，其生长周期相对较短，自花受粉且结种多，被赞为“植物中的果蝇”[4]，很适合作为外源转基因受体，进行遗传分析。拟南芥基因组小，并已测完，将小麦TaRboh基因转入拟南芥进行功能研究，更为方便快捷[5]。在植物中NADPH 氧化酶基因家族又命名为呼吸爆发氧化酶( Respiratory burst oxidasehomologues，Rboh)的同源基因。植物Rboh基因的功能主要集中于两个方面：参与胁迫反应和调控生长发育。当植物受到重金属铅胁迫时, 产生大量产生信号分子活性氧调节基因表达和细胞代谢,使植物及时对铅胁迫作出反应, 以适应环境的变化。重金属胁迫能导致NADPH 氧化酶活性增加，并通过ROS累积产生多种生物学效应。故本文利用模式植物拟南芥进行铅胁迫条件下基因功能研究，对于植物耐受重金属胁迫研究具有理论指导意义和实践应用价值。

1 实验材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 供试植物

拟南芥种子，由西北农林科技大学生命科学院细胞实验室提供。分别是野生型（WT）、突变体型（A2和A4）和超表达型（OE-26-6-3、OE-26-6-7）三种类型、五个株系。

1.1.2  MS培养基

大量元素储备液、微量元素储备液、铁盐、有机元素储备液。本实验还使用蔗糖和琼脂，用以上储备液按需求配制完全营养液并调整PH值为7.8 。

1.1.3 固体培养基材料

 有机土，蛭石

1.1.4 实验器材

立式压力蒸汽灭菌锅、光照培养箱、PH酸度计、电子天平、洁净工作台、移液枪、分光光度仪，低温高速离心机。

1.2 方法

1.2.1 MS培养基的制备

将上述MS培养基的大量元素，微量元素，铁盐，蔗糖按照比例混合后定容于容量瓶中。将定容后的混合液体到入大烧杯中，用混合指示剂调节PH值为7.8 ，加入琼脂，再分装入三角瓶中并封口。将培养皿、移液枪的枪头，以及纯水一起放入自动灭菌锅内120 ℃灭菌20 min。

1.2.2 倒平板

将灭菌后的溶液在无菌操作台中倒入培养皿中，所倒入溶液约占培养皿高度的l／3，再将上盖盖好，冷却待用。