图清单

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图3-1   牛蒡内生菌分离纯化的生长情况 6

图3-2 产蛋白酶内生菌筛选 10

图3-3 产纤维素酶内生菌筛选 10

图3-4 产几丁质酶内生菌筛选 11

图3-5 产淀粉酶内生菌筛选 11

图3-6 产木聚糖酶内生菌筛选 12

图 3-7 基于 16S rRNA 基因序列采用邻接法构建的内生细菌系统发育树 15

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表3-1 牛蒡内生细菌促生潜在性相关特征筛选 7

表3-2 牛蒡内生菌功能酶筛选结果 12

 1.引言

牛蒡(Amtium lappa L.)为两年生的草本药用植物，在我国大陆地区遍布广泛，而且牛蒡的根、茎、叶、种子都有较高的药用价值。牛蒡中含有多种人体所需的维生素和活性成分，营养价值十分丰富，可以用于治疗高血压、提高人体免疫力等[1]。目前，为了提高牛蒡的产量，防治病虫害的影响，在生产过程中大量地使用化学肥料，从而影响了药材的品质，同时也对土壤生态环境造成影响和破坏。现在，社会提倡保护环境，绿色无污染，因此微生物菌肥的开发与应用逐渐被大众所认可和和接受。合理地开发和利用微生物菌肥对牛蒡的种植的效果和对环境的影响，在今后有很大的发展与提升的空间。

植物促生细菌(Plant growth promoting bacteria，PGPB)是指可以在植物的体内或者根际生活的能直接或间接地促进植物生长的微生物[2]。现有研究表明该类菌可以通过固定氮元素、解磷或钾、产生植物生长激素、抗生素、1-氨基环丙烷-1-羧酸(ACC)脱氨酶，直接或间接地促进植物的生长。

就目前而言，对牛蒡进行的研究大多集中在化学成分的提取分离、活性成分的药理学等方面，然则关于牛蒡其内生菌的研究鲜有文章。本次研究通过对牛蒡其内生细菌的分离纯化，而进行对菌株的多样性研究，并且筛选出具有较好促生潜在能力的菌株，为今后进一步深入研究牛蒡内生菌的功能和其促生菌剂的开发奠定的坚实的基础。

2材料与方法

2.1实验材料

2.1.1实验样品来源及其内生菌的分离

该牛蒡植株采自徐州市沛县的河口镇。首先，用清水将收集的牛蒡根、茎、叶的表面进行清洗。然后，在无菌操作台中，用0.1%的吐温冲刷1分钟，5%次氯酸钠溶液消毒4分钟[3]。2.5%硫代硫酸钠溶液消毒10分钟，无菌水冲刷一次，75%乙醇消毒4分钟，无菌水洗濯5次，10%碳酸氢钠溶液冲刷5分钟后，放在无菌滤纸片上吸干水分[4]，再放进100℃烘箱中15分钟[5]。然后，将植物样品放入无菌粉碎机中进行粉碎，再通过梯度浓度稀释后，涂布于LB培养基、营养琼脂(NA)培养基、TSA培养基、ISP 2培养基，28℃培养箱中进行培养一周。根据菌落的颜色、形态等，挑选出平板上生长良好的单菌落，纯化菌株论文网，保存在ISP 2固体斜面上。