摘要：本实验通过对70%丙酮核桃青皮提取物进行分馏、提纯，最终得到五种低分子量没食子酰基单宁酸。通过对其化学性质和光谱（NMR、MS）进行分析，我们发现这五种化合物分别为1，2，6-三没食子酰基--D-葡萄糖（1），3，4，6-三没食子酰基--D-葡萄糖（2），2，3，4，6-四没食子酰基--D-葡萄糖（3），1，2，3，4，6-五没食子酰基--D-葡萄糖（4），单宁酸（5）。对蘑菇酪氨酸激酶活性有很强的抑制力，IC50值为35.27-74.76M。相对地，阳性对照组曲酸IC50值为342.14M。进一步研究表明，当以为研究对象时，可以抑制黑色素生成，同时降低胞内酪氨酸激酶基因的转录和翻译水平。因此，化合物1-5在化妆品的皮肤美白行业中将有着广阔的前景。56700

关键词：漾濞泡核桃；提取物；没食子酰基单宁酸；酪氨酸激酶；B16F10小鼠黑色素瘤细胞

ABSTRACT：The phytochemical investigation,including fraction and purification of 70% acetone extracts of seed husks, an agricultural residue, led to the isolation of five low-molecular weight galloyltannins. The strctures of the extractives were elucided as 1,2,6-tri-O-galloyl-- -glucose(1), 3,4,6-tri-O-galloyl--glucose(2), 2,3,4,6-tetra-O-galloyl--glucose(3), 1,2,3,4,6-

penta-O-galloyl--glucose(4), tannic acid(5), primarily based on their spectral (NMR、MS) and chemical evidence. Galloyltannins 1-5 showed strong inhibitory activity against mushroom tyrosinase, with s ranging from 35.27 to 74.76M; kojic acid, which was used as a positive control, had an IC50 value of 342.14M. It was further found that 1-5 inhibited melanin produ- ction and exhibited intracellular tyrosinase activity , as well as down-regulated mRNA and prot- ein expression levels of tyrosinase, in B16F10 mouse melanoma cells. Therefore, the isolated from seed husks of J. Sigillata may serve as potential candidates for hyperpigmentation reme- diation and as skin-writening agents in the cosmetics industry.

Keywords:

Juglans sigillata; Extractives; Galloyltannin; Tyrosinase; B16F10 mouse melanoma cells

目录

1  前言 4

2  实验及方法 10

2.1  植物取材 10

2.2  萃取和分馏 10

2.3  低分子量没食子酰基单宁酸的分离 11

2.4  蘑菇酪氨酸激酶活性分析 11

2.5  细胞系与细胞培养 12

2.6  胞内酪氨酸激酶活性的测定 12

2.7  统计学分析 12

3  结果与讨论 12

3.1  低分子量没食子酰基单宁酸的化学结构 13

3.2  提取物对于蘑菇酪氨酸激酶活性的抑制力 13

3.3  提取物1-5对于B16F10小鼠黑色素瘤细胞酪氨酸激酶活性影响的实验结果 14

结论 16

参考文献 17

致谢 21

1  前言

酪氨酸激酶是一组催化蛋白质酪氨酸残基磷酸化的酶， 能催化ATP上的磷酸基团转移到许多重要的酪氨酸残基上，使其残基磷酸化[2]，激活细胞内下游信号转导途径， 调节细胞的增殖、分化、迁移等生物效应。蛋白酪氨酸激酶按其结构可分为受体酪氨酸激酶( RPTK)和非受体酪氨酸激酶(NRPTK)[3]。受体酪氨酸激酶通常只具有一个可以与特定配体相结合的细胞外结构域、一个跨膜区及一个可以选择性地与底物结合并将其磷酸化的细胞内激酶域。将配体与受体酪氨酸激酶的细胞外结构区域结合， 引起其结构改变从而产生酶催化活性。许多受体酪氨酸激酶都与肿瘤的形成相关， 其原因可能包括基因突变、重排或激酶的过度表达。目前已知的约60个受体酪氨酸激酶根据其细胞外区域结构的不同可被分为20多个亚家族，如图1所示[3]。