的磷酸100ml，最后用蒸馏水定容至1000ml；

牛血清白蛋白标准溶液：100mg牛血清白蛋白，溶于100ml蒸馏水中，即为1000ug/ml

的原液；

固定液：50%乙醇，10%冰醋酸水溶液；

染色液：45%甲醇，10冰醋酸，0。25%考马斯亮蓝G250(电泳级)水溶液，过滤备用；

漂洗液：25%乙醇，8%冰醋酸水溶液；

1%的氯化钡溶液，1%的硫酸溶液，2。5%戊二醛，0。1mol/L磷酸缓冲液(pH7。2)，1%葡萄

    糖溶液，丙二酸、碘乙酸、磷酸钠，碱性磷酸酶试剂盒；文献综述

1。3试验仪器

透射电镜、恒温摇床、PH测试仪、冰冻离心机、溶解氧分析仪、紫外可见分光光度计、电热恒温水浴锅、生物洁净工作台、高压蒸汽灭菌锅

2 试验方法

2。1  石榴皮提取物抑制溶酪大球菌生长曲线的绘制

第一步：麦氏比浊法绘制标准曲线

（1）配制l%的氯化钡溶液100ml，l%的硫酸溶液500ml；

（2）按照表2-1将氯化钡和硫酸溶液混合，混合后得到的硫酸钡溶液沉淀浓度约相

当于细菌浓度；

用分光光度计在530nm下读取6个管的吸光度值，用蒸馏水做对照。

表2-1硫酸钡标准管的制备

编号 1 2 3 4 5 6

l%氯化钡溶液（ml） 0。2 0。3 0。4 0。5 0。6 0。7

l%硫酸（ml） 9。8 9。7 9。6 9。5 9。4 9。3

细菌近似浓度（108/cfu） 6 9 12 15 18 21

A530 0。5221 0。7318 09646 1。1578 1。3707 1。5641

Figure 2-1  McFarland’s turbidity standard curve

第二步：菌液生长曲线的测定

150ml液体牛肉膏蛋白胨培养基中加入500μl已活化的溶酪大球菌液，同时加入50μl浓度为0。5g/ml的石榴果皮正丁醇萃取液，200rpm，37℃摇床培养。根据麦氏比浊标准曲线计算菌液浓度达到1。0×108cfu/ml之前每隔4h取样5ml，菌液达到该浓度后，每隔4h取样，共取样48h，在600nm下测菌液的吸光度值，做出经石榴果皮正丁醇萃取液处理后的溶酪大球菌的生长曲线图，以不加萃取液的菌液作为阴性对照。来,自,优.尔:论;文*网www.youerw.com +QQ752018766-

2。2  石榴皮提取物对溶酪大球菌利用糖的影响

第一步：标准曲线的绘制

分别量取100μg/ml的葡萄糖溶液（0、0。2ml、0。4ml、0。6ml、0。8ml、1。0ml）加入6支试管并编号，用蒸馏水将每支试管中的溶液补足到1。0ml，再各加入4ml蒽酮试剂摇匀，同时置于沸水浴10min，迅速冷却，待溶液达到室温后以空白管为对照，测各管在620nm处的吸光度值，以糖含量为横坐标，A620为纵坐标做标准曲线