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酶解法研制荞麦多肽的研究江南大学食品学院的郭晓娜,崔颖,张晖,姚惠源三人发现在弱碱性及碱性条件下，中性蛋白酶、碱性蛋白酶较易打开带有疏水性侧链的氨基酸前后的肽键,形成含有疏水性氨基酸末端的肽段。他们以苦荞麦蛋白质作为底物，分别采用碱性蛋白酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶Alcalase2.4L、高效水解蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶对其进行酶法水解,其中碱性蛋白酶(固体)和胰蛋白酶的水解速度最快, 碱性内切蛋白酶Alcalase2.4L和高效水解蛋白酶水解速度其次，中性蛋白酶和木瓜蛋白酶相对较低。所以,选择合适的蛋白酶和控制适当的水解度是制备苦荞蛋白活性多肽的关键[2]。22924
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周小理,李红敏,周一鸣以以多肽浓度和水解度 DH)为评价指标，采用木瓜蛋白酶将苦荞麦蛋白水解成为低分子量的苦荞麦多肽，分别对加酶量、pH、固液比 、温度、酶解时间五个因素对木瓜蛋白酶酶解效果的影响进行了研究，确定出木瓜蛋白酶酶解的适宜工艺条件为加酶量 23%,底物16U/g,pH5.5,酶解温度55℃,酶解时间4h和底物固液比为l:12,酶解液的多肽浓度为6.28mg/mL, DH为30.83% 。并且发现苦荞麦多肽液的抗氧化活性在酶解2h时达到最大[3]。论文网
丰凡采用酶法水解荞麦蛋白得到荞麦多肽 ,经隆丁快速测定法分级显示多肽分子量均小于2 300 Da。通过与荞麦蛋白对比发现荞麦多肽的抗氧化活性明显优于荞麦蛋白,其中羟基自由基清除率为 45.4%,ABTS(22一连氮基 •3一乙基苯并唾毗咯琳一6一磺酸)自由基清除率为 99.05% ,超氧阴离子清除率为 80.33% ,DPPH 清除率为 46.6% ,亚油酸氧化抑制率最大可达到 84.8%。此外荞麦多肽的ACE(血管紧张素转换酶)抑制率也高于养麦蛋白[4]。
张超、郭贯新、张晖三人在使用酶法、酸法和碱法分别进行苦荞麦蛋白质提取试验时，发现采用碱性蛋白酶提取工艺效果最好，最佳的工艺条件为温度35℃、梅的用量为50U/g、料水比为1：2、pH等于11、反应时间30min,迅速灭菌，在pH为4.2的溶液中进行沉淀，去离子水洗，最后经过喷雾干燥即可获得苦荞麦蛋白质固体粉末，蛋白质的提取率为76%，其固体粉末的蛋白质含量为68%[5]。
李红敏、周小理等人研究了荞麦多肽液的抗氧化活性 ,实验分别采用木瓜蛋 白酶、Protame —nx酶、Alcalase酶、Flavourzyme酶以及 Neutrase中性蛋白酶酶解荞麦复合蛋白,并以亚油酸一硫氰酸铁法测定多肽液的抗氧化活性,发现经不同酶酶解得到的荞麦多肽液的抗氧化活性有所不同,其中Protamex复合酶水解2h后的荞麦多肽液抗氧化活性最强,Alcalase Food Grade水解蛋白酶水解1 h 后的多肽液次之,之后依次为 Neu- trase中性蛋白酶水解1h后的多肽液,木瓜蛋 白酶水解2h后的多肽液, Flavourzyme复合蛋白酶水解3h后的多肽液[6]。
沈阳农业大学的崔霞采用单因素试验和正交试验方法,研究ASl.398中性蛋白酶和2709碱性蛋白酶水解苦荞麦蛋白粉提取苦荞麦活性肽的最佳酶解工艺。试验 结果表明:2709碱性蛋白酶提取苦养麦活性肽优于ASl.398中性蛋白酶;2709碱性蛋白酶提取苦荞麦活性肽的最佳提取条件为:温度45°C、pH 11、酶量60u/g、时间14h, 极差值分析反映出影响苦养麦活性肽蛋白质提取率的各因素的排列顺序为;酶量>温度>pH>时间,在此条件下蛋白质提取率可达74.5%。以SephadcxG.25柱层析纯化苦荞麦活性肽,毛细管电泳确定其纯化效果,采用氯化硝基四氮唑蓝(NBT)光还原法研究其抗氧化作用,高效液相凝胶色谱(HPLC)确定分子量,氨基酸自动分析仪测定其氨基酸组成。 结果表明:苦荞麦活性肽经SephadexG-25层析后能得到粗分离;苦养麦活性肽对超氧阴离子自由基有很强的清除作用,清除率达到37.12%:苦荞麦活性肽的相对分子量集中在100一1000Da:氨基酸组成分析表明,苦荞麦活性肽由17种氨基酸组成,含有7 种人体必需氨基酸(Val、Ile、Leu、Phe、Mel、r11lr、Lys),占苦荞麦活性肽氨基酸总含量的31.11%,因此,苦养麦活性肽具有较高的营养价值和较强的保健功能[7]。