小胶质细胞作为中枢神经系统固有的免疫效应细胞，不论在正常的生理状态下还是在病理损伤状态下均有重要作用[2]。正常的生理状态下的小胶质细胞对维持脑内环境稳定具有重要作用。但在中枢神经系统损伤的病理生理过程中，小胶质细胞迅速活化增殖，在脑损伤中发挥着双刃剑作用；小胶质细胞激活所起的损伤作用受到广泛的研究[2]。目前研究表明，小胶质细胞大量激活是大多数中枢神经退行性疾病发生发展的重要调节因素[3]。中枢神经退行性疾病以PD为例，PD的主要病理特征是黒质纹状体通路的多巴胺（dopamine，DA）神经元退行性变性和缺失。研究表明，小胶质细胞激活在DA神经元变性损伤中起关键作用；在受到各种病理因素刺激时，小胶质细胞大量激活，产生前炎性细胞因子和神经毒性因子，启动或加重神经元损伤，导致DA神经元进行性变性死亡[4]。所以，研究小胶质细胞激活与神经元损伤之间的关系具有重大的意义。来自优W尔Y论W文C网WWw.YoueRw.com 加QQ7520,18766

现在已经有大量的实验证明，脂多糖（lipopolysaccharide, LPS）诱导的炎症反应会引起神经元损伤/退化以及认知障碍等神经系统炎症反应。脂多糖通过激活脑内小胶质细胞，产生炎症细胞因子如白细胞介素-1β（Interleukin-1β， IL-1β）和肿瘤坏死因子（tumor necrosis factor-α， TNF-α），引起脑内神经元变性死亡。现在已有大量动物实验采用脑室内或者腹腔注射脂多糖诱导的脑炎症模型来研究中枢神经退行性疾病（AD, PD 等）和脑血管病相关炎症反应。Li等用腹腔注射脂多糖诱导的脑炎症模型研究低分子肝素（Low Molecular Weight Heparin，LMWH）预防认知障碍的作用机理。van Buel等用该模型研究电惊厥治疗是否能够预防动物行为学改变和小胶质细胞激活。

本实验采用健康成年雄性SD大鼠，建立脂多糖诱导的脑炎症模型，观察脂多糖诱导海马和皮层小胶质细胞激活改变，并进一步探讨脂多糖诱导脑内小胶质细胞活化及对神经元的影响。

1。实验材料

1。1实验动物

成年SD大鼠，体重（200～250 g）。大鼠购买于杭州师范大学动物实验中心。实验前大鼠称重分笼饲养，饲养条件为室温22～25 ℃，12小时明暗循环。大鼠允许自由进食和饮水。所有动物实验步骤符合国家要求。

1。2化学药品与试剂

1。2。1 化学药品：脂多糖（购自美国 Sigma有限公司）；氯化钠（购自上海沃凯生物技术有限公司）；

1。2。2 化学试剂：甲醛（购自上海沃凯生物技术有限公司）；水合氯醛（购自上海沃凯生物技术有限公司）；多聚赖氨酸（购自上海生工生物工程有限公司）；二甲苯（分析纯，购自上海沃凯生物技术有限公司）；无水乙醇（分析纯，购自上海沃凯生物技术有限公司）；BSA（购自上海生工生物工程有限公司）；羊源Anti-iba-1抗体（购自英国Abcam公司）；PV-9003抗羊超敏二步法检测试剂盒（购自北京中杉金桥生物技术有限公司）；DAB染色试剂盒（购自北京中杉金桥生物技术有限公司）；枸橼酸钠（购自北京中杉金桥生物技术有限公司）；免疫组化液体石蜡笔（购自北京中杉金桥生物技术有限公司）；苏木精（购自上海生工生物工程有限公司）；伊红（购自上海生工生物工程有限公司）。

1。3化学溶液

1。3。1 生理盐水（称取氯化钠9 g，加去离子水定容至1000 ml，4 ℃保存）；

1。3。2 脂多糖溶液（称取脂多糖0。05 g，加生理盐水定容至40 ml，4 ℃保存）；

1。3。3 10%水合氯醛溶液（称取水合氯醛40 g，加去离子水定容至400 ml，4 ℃避光保存）；