2。3。5 包埋：将透明完全的脑组织放入包埋夹浸入58～60℃的已熔的石蜡内。浸2道蜡，每道2小时，使石蜡充分渗透入脑组织间。将浸蜡完全的脑组织快速取出，以海马面为底面，一边倒蜡一边放入模具，待其表面凝固出现一层膜后，迅速浸入冷水中，约15分钟后拿出，在蜡块上做好标记。包埋完成的标志是观察到脑组织被石蜡充分包裹。

包埋过程中，需要注意的有以下几点。浸蜡后要保持脑组织的温度，才能包裹完整。包埋模具可预热，但是温度太高会使蜡与模具粘合紧密，在强制取出蜡块时会发生蜡块碎裂，更严重的是连带组织一起破损。

2。4 载玻片前处理

将新购买的载玻片从包装盒中取出，先用洗洁精清洗，在用自来水冲洗去除泡沫，放入烘箱内烘干后置于铬酸洗液缸中浸泡过夜，去除污物。将载玻片捞出后，用自来水冲洗2次，放入去离子水浸泡30分钟，换水后再用去离子水冲洗，置于50 ℃的烘箱中烘干。取出后用擦镜布擦净，用干净的棉签蘸取多聚赖氨酸溶液（0。1%）均匀的涂布在载玻片带磨砂的一面，待其自然阴干。涂布、阴干过程中尽量减少粉尘落于载玻片上，将涂布后的载玻片置于玻片盒中，4 ℃冰箱保存备用。文献综述

2。5 石蜡切片

2。5。1 切片：用刀片休整蜡块。将休整完的蜡块固定在石蜡切片机上，以8 µm的厚度切取脑组织。参照大鼠脑立体定位图谱，切出大鼠海马存在的蜡片；

2。5。2 漂片：待石蜡薄片完全展平后，用已编号且已涂布10%多聚赖氨酸的载玻片将其捞起。捞起过程中，要尽量赶去石蜡薄片与载玻片之间的气泡，防止组织脱落。要求每个载玻片上平整地放：用毛笔轻托石蜡薄片放入漂片仪的43℃温水内，静置；

2。5。3 捞片：置2个石蜡薄片，且每个薄片距离适宜；

2。5。4 烤片：将载有石蜡薄片的载玻片放置在烤片仪上，在42℃温度下烤6小时。将烤好的切片，放在盒子里，4℃冰箱保存。

2。6 免疫组织化学染色

2。6。1 烤片：将石蜡切片从载玻片盒中取出，将石蜡切片放在烤片仪上烤1-2小时，可以让免疫组化结果更佳；